[發明專利]包括使用多核苷酸報道分子和跨膜孔的確定靶分析物的存在或不存在的方法

在審

• 申請號: 202310256531.6
• 申請日: 2018-05-03
• 公開（公告）號: CN116338174A
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 丹尼爾·喬治·福德姆
• 申請（專利權）人: 牛津納米孔科技公開有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/52
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 李艷;臧建明

1.一種確定樣品中靶分析物存在或不存在的方法，所述方法包括：

(a)將所述樣品中存在的任何靶分析物固定在表面上；

(b)使所述表面與以下接觸：(i)與靶分析物特異性結合的第一檢測劑；和(ii)多核苷酸報道分子，其中所述多核苷酸報道分子與第一檢測劑結合著或結合；和

(c)使跨膜孔與通過第一檢測劑與所述靶分析物的結合固定在所述表面上的任何多核苷酸報道分子接觸，并使用所述跨膜孔檢測所述多核苷酸報道分子，從而確定所述樣品中所述靶分析物的存在或不存在。

2.根據權利要求1所述的方法，其包括確定所述樣品中所述靶分析物的濃度。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中:

(ⅰ)通過結合特異性結合所述靶分析物的捕獲劑將所述靶分析物固定在所述表面上，該捕獲劑被固定在所述表面上；

(ⅱ)通過與抗體結合將所述靶分析物固定在所述表面上，該抗體被固定在所述表面上，可選地，其中所述抗體特異性結合所述靶分析物。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中：

(ⅰ)所述靶分析物是靶抗體；和/或

(ⅱ)所述第一檢測劑包含抗體。

5.根據權利要求4所述的方法，其中：(a)第一檢測劑是與所述靶抗體結合的抗體，并且所述捕獲劑是所述靶抗體結合的抗原；或者(b)第一檢測劑是所述靶抗體結合的抗原，并且所述捕獲劑是與所述靶抗體結合的抗體。

6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中：

(ⅰ)所述多核苷酸報道分子間接地與第一檢測劑結合著或結合，可選地，其中所述多核苷酸報道分子通過結合第一劑的第二檢測劑與第一檢測劑結合著或結合，可選地，其中所述第二檢測劑包含抗體；和/或

(ⅱ)第一檢測劑或第二檢測劑包含：

(A)親和標簽的第一組分和(Ⅰ)所述多核苷酸報道分子與特異性結合所述第一組分的親和標簽的第二組分連接；或(Ⅱ)所述多核苷酸報道分子與親和標簽的第一組分連接，并且與第一組分特異性結合的親和標簽的第二組分用于將第一檢測劑或第二檢測劑與所述多核苷酸報道分子連接，可選地，其中所述親和標簽的第一組分是生物素，所述親和標簽的第二組分是鏈霉抗生物素蛋白；或

(B)與所述多核苷酸報道分子的至少部分雜交的寡核苷酸。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中兩種或更多種多核苷酸報道分子與第一檢測劑結合著或結合，可選地，其中兩種或更多種多核苷酸報道分子是相同的。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，包括確定所述樣品中兩種或多種靶分析物的存在或不存在，其中使用不同的多核苷酸報道分子檢測每種靶分析物，并使用所述跨膜孔確定所述多核苷酸報道分子的成分。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述兩種或更多種靶分析物：

(ⅰ)被固定在單獨的表面上；或

(ⅱ)被固定在同一表面上；可選地，其中(A)每種所述多核苷酸報道分子僅與一種特異性結合一種靶分析物的第一檢測劑結合，或(B)所述多核苷酸報道分子在步驟(b)之前與第一檢測劑結合。

10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中：

(ⅰ)所述樣品來自個體，并且在步驟(c)中，所述跨膜孔用于同時分析來自所述個體的一種或多種多核苷酸，可選地，其中所述一種或多種多核苷酸是所述個體的外顯子組或轉錄組的一部分；和/或

(ⅱ)所述靶分析物是疾病生物標志物。