[發(fā)明專利]一種煙草疫霉誘導的miR6155及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310244849.2
• 申請日: 2023-03-13
• 公開（公告）號: CN116515826A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設計）人: 黃園園;鄧可宣;李賾萱;張建奎;呂俊;曾倩;楊石猛;戴秀梅;宗學鳳
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H6/82;A01H5/00
• 代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

本發(fā)明公開了一種煙草疫霉誘導的miR6155及其用途。煙草疫霉誘導的miR6155的前體序列的RNA片段的序列為SEQ?ID?NO:1所示。其成熟序列的RNA片段的序列如SEQ?IDNO:2所示。還公開了含有成熟序列的生物材料，及培育對黑脛病抗性敏感的煙草的方法。本發(fā)明通過構建過表達載體和煙草遺傳轉化，發(fā)現(xiàn)miR6155過表達植株顯著增強了煙草對黑脛病的抗性。本發(fā)明有助于更深入探討煙草和黑脛病菌互作中miRNA的調控機制，為煙草抗性品種的選育提供新的種質資源，推動煙草抗黑脛病遺傳機理和抗病分子育種研究，為增強煙草的黑脛病抗性的分子生物學機制研究提供可靠的材料和數(shù)據(jù)支撐。

技術領域

本發(fā)明涉及RNA領域，尤其涉及一種煙草疫霉誘導的miR6155及其用途。

背景技術

煙草(Nicotiana?tabacum?L.)是茄科煙草屬植物，具有較高的經(jīng)濟價值。然而由寄生煙草疫霉菌(Phytophthora?nicotianae)引發(fā)的煙草黑脛病(tobacco?black?shank)作為一種世界性病害，在世界各地多有發(fā)生。煙草黑脛病發(fā)病后對煙草毀滅性極強，在煙草種植生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失。煙草疫霉屬于卵菌綱，疫霉屬，形狀為無色透明的菌絲狀，菌絲有較細的分枝，繁殖能力強。煙草疫霉以菌絲或厚垣孢子的形式長期寄生在植物病殘體或土壤中，遇到適宜的生長條件時，便會萌發(fā)并釋放出大量的游動孢子，通過植物氣孔和傷口等侵入煙草。煙草黑脛病害一般在高溫高濕的環(huán)境下爆發(fā)，可以在煙草的整個生育期發(fā)病，多發(fā)于成株期，主要以侵染煙草植株的莖基部和根部為主，在較短的時間內沿莖向上蔓延，導致煙草莖部變黑直至枯萎腐爛，使煙草水分、營養(yǎng)等運輸受阻從而使煙草葉片變黃變干，最后整株煙草死亡。煙草疫霉菌在高溫高濕環(huán)境下傳播速度極快，會導致整個煙草種植區(qū)遭受病害，毀滅性極強。在煙草幼苗期也會受到黑脛病的干擾，幼苗期的煙草黑脛病最開始從根莖部發(fā)病，逐漸蔓延到莖上部，最后病斑面積擴散至整株煙草。當進行漂浮育苗時，空氣相對濕度較高，黑脛病病原菌一旦侵染上，就會引起煙苗根部腐爛并迅速擴散到周圍的煙苗，造成大規(guī)模死亡。針對煙草黑脛病的防治方法主要有以下幾種：種植抗病品種、優(yōu)化栽培管理措施、化學及生物防治等方法來預防和防治煙草黑脛病。傳統(tǒng)的病害防治方法存在效率低、農藥殘留、環(huán)境污染等問題。利用黑脛病抗性煙草品種來種植生產(chǎn)是防治煙草黑脛病害最有效的方法之一，因此通過分子生物學方法篩選鑒定更多有效的黑脛病抗病基因，培育生產(chǎn)中可以廣泛使用的煙草黑脛病高抗品種十分重要。

MicroRNAs(miRNAs)是一類非編碼內源RNA小分子，通過抑制靶基因所編碼的蛋白的翻譯或者剪切靶基因mRNAs來發(fā)揮不同的生物學功能。隨著測序技術的快速發(fā)展，大量的miRNA被發(fā)現(xiàn)，研究者們逐漸獲得了關于植物miRNAs生物合成、作用機制以及可能的生物學功能等方面的信息。1993年第一個miRNA?lin-4在秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans)中被Lee等人發(fā)現(xiàn)；第一個植物miRNA即miRl71，發(fā)現(xiàn)于擬南芥中。植物miRNA的生物合成過程主要包括以下三個步驟：轉錄、加工成熟以及功能復合體裝配。miRNA的作用方式主要有兩種：當其與靶mRNA的序列互補程度較高時，miRNA會介導靶標的切割，使其無法正常翻譯，這是植物中miRNA發(fā)揮作用的主要方式。但當兩者互補程度較低時，miRNA無法介導切割，此時會通過與靶mRNA結合的方式來抑制其翻譯。植物miRNAs參與調節(jié)植物生長和發(fā)育過程，并且廣泛參與對生物和非生物脅迫的響應。通過過表達或沉默miRNAs，其在植物中的功能逐漸被揭示。例如，有報道利用高通量測序方法對煙草品種‘紅花大金元’的葉片、莖和根的miRNA表達譜進行了綜合分析，共鑒定出165個miRNAs，mRNA和miRNA的聯(lián)合分析揭示了煙草耐鹽耐堿脅迫的分子機制。煙草中miRNA對病原菌的響應也有一定研究，發(fā)現(xiàn)miRNA和mRNA的表達模式都可以在應對PVY感染時發(fā)生變化，可能在煙草對PVY的抗性方面有一定調控作用。然而，目前為止，關于miRNAs在煙草響應煙草疫霉中的作用研究很少。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種煙草疫霉誘導的miR6155及其用途。