[發(fā)明專利]一種熱激蛋白基因LbHSP17.9在改變切花百合抗旱性中的應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202310240858.4
• 申請日: 2023-03-14
• 公開（公告）號: CN116284298A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設計）人: 文錦芬;趙家惠;趙子賢;鄧明華
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/56
• 代理公司: 昆明同聚專利代理有限公司 53214
• 代理人: 謝丹丹

1.一種熱激蛋白基因LbHSP17.9?在改變切花百合抗旱性中的應用，其特征在于，所述基因LbHSP17.9具有SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列，SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列能夠編碼SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列，在百合中增強LbHSP17.9基因的表達量，以提高切花百合的抗旱性。

2.根據(jù)權利要求1所述的熱激蛋白基因LbHSP17.9在改變切花百合抗旱性中的應用，其特征在于：具體步驟如下：

利用?LbHSP17.9基因序列設計引物LbHSP17.9-F與LbHSP17.9-R和LbHSP17.9-F’，以黃天霸cDNA為模板進行PCR擴增LbHSP17.9基因，獲得目的片段LbHSP17.9基因片段；

PC1300S-GFP載體用KpnI與BamHI雙酶切處理并回收，與步驟（1）的PCR擴增產(chǎn)物LbHSP17.9基因片段進行重組得到重組產(chǎn)物，將重組產(chǎn)物轉化到大腸桿菌上，然后涂抗性平板，挑選克隆子及搖菌，然后將引物A580-seqR與LbHSP17.9-F’菌落通過PCR技術進行陽性克隆的驗證，然后進行測序驗證得到表達OE-LbHSP17.9的細菌培養(yǎng)物；

將表達OE-LbHSP17.9的細菌培養(yǎng)物重懸在浸潤緩沖液中，然后在22℃無光條件下放置5小時，得到侵染液；

（4）將侵染液通過真空侵染轉化至切花百合中，以提高切花百合的抗旱性。

3.根據(jù)權利要求2所述的熱激蛋白基因LbHSP17.9在改變切花百合抗旱性中的應用，其特征在于：步驟（1）中設計引物是利用軟件Primer?Premier?5進行設計。

4.根據(jù)權利要求2所述的熱激蛋白基因LbHSP17.9在改變切花百合抗旱性中的應用，其特征在于：步驟（1）中引物具體基因序列如下：

引物：LbHSP17.9-F：GCTTTCGCGAGCTCGGTACCATGTCGATCATCCGCAGGAGCAACGTCT

LbHSP17.9-R:?CGCCCTTGCTCACCATGGATCCGCCAGAGATATCGATGGATTTG

LbHSP17.9-F’:?CTAGAAGGCCTCCATGGGGATCCCTAACACCCGCATCGACTGG。

5.根據(jù)權利要求2所述的熱激蛋白基因LbHSP17.9在改變切花百合抗旱性中的應用，其特征在于：步驟（3）的浸潤緩沖液分為兩種：10mM?MES與10mM?MgCl混合后調(diào)pH5.6；200M乙酰丁香酮溶液。

6.根據(jù)權利要求2所述的熱激蛋白基因LbHSP17.9在改變切花百合抗旱性中的應用，其特征在于：引物A580-seqR是根據(jù)PC1300S-GFP載體骨架設計的，基因序列為AGAAGATGGTGCGCTCCTG。