[發(fā)明專利]保健品中利血平的快速檢測(cè)裝置及其制備與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310237901.1
• 申請(qǐng)日: 2023-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN116023376B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳民富;李莎;吳民華;賀勁鋒;高柔敏;詹清敏;林立棟;周彩琴;張少敏;劉考鈺;周歡欣;吳暉琳;盧玉萍;林木健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 佛山職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07D459/00
• 分類號(hào): C07D459/00;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/53;G01N33/58
• 代理公司: 北京中仟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11825
• 代理人: 栗蕓茜

本發(fā)明公開了保健品中利血平的快速檢測(cè)裝置及其制備與應(yīng)用，涉及利血平半抗原、抗原、抗體、膠體金層析檢測(cè)裝置及其制備和檢測(cè)保健品中利血平的應(yīng)用。本發(fā)明提供由利血平半抗原偶聯(lián)載體蛋白制備的人工抗原，以及免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后使其機(jī)體產(chǎn)生的特異性針對(duì)利血平的抗體，效價(jià)高，其IC50值為2.51?ng/mL。本發(fā)明提供的免疫學(xué)檢測(cè)方法針對(duì)保健品中的利血平，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本低、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，能更好的滿足監(jiān)管部門、檢測(cè)機(jī)構(gòu)現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督執(zhí)法的需要。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種保健品中利血平的快速檢測(cè)裝置及其制備與應(yīng)用。

背景技術(shù)

降壓類西藥降壓療效迅速，但長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生某些副作用，患者希望服用副作用小的中成藥。造假者為迎合患者的這一需求，在一些降壓中成藥及保健品中擅自添加氫氯噻嗪、利血平、鹽酸可樂定、硝苯地平等降壓西藥。患者誤認(rèn)為中成藥屬天然中藥不知其中添加了西藥，如再與西藥降壓藥同服，往往使血壓驟然下降或發(fā)生較大波動(dòng)，還易加重腎損害誘發(fā)中風(fēng)甚至造成生命危險(xiǎn)。BJS?201710《保健食品中75種非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)》中將利血平列為重要檢測(cè)物質(zhì)之一。加強(qiáng)對(duì)中成藥及保健品添加化學(xué)藥品鑒別方法的分析研究，可以進(jìn)一步提高藥品監(jiān)督管理部門對(duì)流通環(huán)節(jié)中假劣中成藥及保健品的查處，使制售假藥的違法行為得到有效扼制。

目前，關(guān)于利血平的檢驗(yàn)方法主要有高效液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、薄層色譜法、分光光度法、毛細(xì)管色譜法等。專利申請(qǐng)?zhí)枮?01310082621.4，專利名稱為一種測(cè)定利血平含量的高效液相色譜方法的發(fā)明專利，公開了使用高效液相色譜法對(duì)利血平制劑及原料藥中利血平的含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。但是上述采用大型儀器的檢測(cè)方法具有操作繁瑣、檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，不滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)需求的問題。

因此，亟需設(shè)計(jì)和開發(fā)出合適的利血平半抗原，并由此建立保健品中利血平的快速檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)通過免疫學(xué)方法來快速檢測(cè)保健品及中成藥中的利血平，以滿足藥品監(jiān)督管理部門對(duì)中成藥及保健品進(jìn)行快速檢測(cè)的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供了利血平半抗原、抗原、抗體、檢測(cè)裝置及其制備和檢測(cè)方法，針對(duì)于保健品中的利血平進(jìn)行快速檢測(cè)。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了利血平半抗原，其結(jié)構(gòu)如式（Ⅰ）所示：

（Ⅰ）。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了制備利血平半抗原的方法，包括以下步驟：

S1.?將利血平、3-溴丙炔用DMF溶解，在-20℃下加入氫化鈉，反應(yīng)生成含有炔烴結(jié)構(gòu)的中間體1，中間體1的結(jié)構(gòu)式如下式所示，

；

S2.?將含有炔烴結(jié)構(gòu)的中間體1與疊氮乙酸在七水硫酸銅催化下，生成帶有穩(wěn)定的三氮唑結(jié)構(gòu)以及羧基結(jié)構(gòu)的目標(biāo)物，即制得式（I）所示的利血平半抗原。

在一些實(shí)施方式中，步驟S1中利血平、3-溴丙炔、氫化鈉的摩爾比為1：（1~2）：（3~4）。

在一些實(shí)施方式中，步驟S2中中間體1與疊氮乙酸的摩爾比為1：（2~3）。

根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，利血平抗原為利血平半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物，載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、雞卵清白蛋白或血藍(lán)蛋白。

根據(jù)本發(fā)明的第四個(gè)方面，利血平抗體是由利血平抗原經(jīng)動(dòng)物免疫制備得到，利血平抗體為利血平單克隆抗體。

根據(jù)本發(fā)明的第五個(gè)方面，提供了利血平半抗原、利血平抗原在利血平的免疫學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明的第六個(gè)方面，檢測(cè)裝置為利血平膠體金層析檢測(cè)卡，其中，檢測(cè)裝置包括NC膜、金標(biāo)墊、樣品墊、吸水墊以及PVC底板，NC膜上有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測(cè)區(qū)包被有利血平抗原，金標(biāo)墊中含有膠體金標(biāo)記的利血平抗體。