[發明專利]一種組合物、試劑盒及檢測大腸桿菌細胞基因組DNA的方法和應用

在審

• 申請號: 202310235769.0
• 申請日: 2023-03-13
• 公開（公告）號: CN116555452A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 吳言華;張雙宇;劉玉方;李曉晨;孫克非
• 申請（專利權）人: 天根生化科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/19
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 朱欣欣

1.一種組合物，其特征在于，所述組合物包括引物和探針，所述引物選自A1~A5；

A1：上游引物序列F1如SEQ?ID?NO:2所示，下游引物序列R1如SEQ?ID?NO:3所示；

A2：上游引物序列F2如SEQ?ID?NO:5所示，下游引物序列R2如SEQ?ID?NO:6所示；

A3：上游引物序列F3如SEQ?ID?NO:8所示，下游引物序列R3如SEQ?ID?NO:9所示；

A4：上游引物序列F4如SEQ?ID?NO:11所示，下游引物序列R4如SEQ?ID?NO:12所示；

A5：上游引物序列F5如SEQ?ID?NO:14所示，下游引物序列R5如SEQ?ID?NO:15所示。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述探針選自探針序列P1~P5；

探針序列P1如SEQ?ID?NO:4所示；

探針序列P2如SEQ?ID?NO:7所示；

探針序列P3如SEQ?ID?NO:10所示；

探針序列P4如SEQ?ID?NO:13所示；

探針序列P5如SEQ?ID?NO:16所示。

3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述探針的5’端標記熒光基團，3’端標記猝滅基團；所述熒光基團選自FAM、ROX、VIC、CY5、CY3、HEX、5-TAMRA、TET和JOE；

優選地，所述熒光基團為FAM，所述猝滅基團為BHQ1。

4.一種試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-3中任一項所述的組合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR緩沖液、鹽離子、dNTPs、DNA聚合酶中的至少一種；

優選地，所述DNA聚合酶為Taq?DNA聚合酶；

優選地，所述鹽離子為Mg²⁺。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR增強劑；

以及DNA提取試劑和/或核酸純化試劑。

7.一種檢測大腸桿菌細胞基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：將待測樣品置于PCR擴增體系中進行擴增反應；

所述PCR擴增體系包括權利要求1-3中任一項所述的組合物或利用權利要求4-6中任一項所述的試劑盒配制而成。

8.根據權利要求7所述的檢測大腸桿菌細胞基因組DNA的方法，其特征在于，所述PCR擴增體系中，上游引物序列、下游引物序列和探針的摩爾比為（4-10）：（4-10）：（3-6）；

優選地，所述上游引物序列、所述下游引物序列和所述探針的摩爾比為（4-6）：（4-6）：（3-5）。

9.根據權利要求7或8所述的檢測大腸桿菌細胞基因組DNA的方法，其特征在于，所述PCR擴增反應的條件為：90℃-97℃、0.8-1.5min，1個循環；90℃-97℃、3-10s，55-65℃、10-20s，38-42個循環。

10.如權利要求1-3中任一項所述的組合物、權利要求4-6中任一項所述的試劑盒在檢測生物制品中大腸桿菌細胞基因組DNA中的應用。