[發(fā)明專利]一種凡納濱對(duì)蝦肝腸胞蟲抗性性狀的組合分子標(biāo)記、KASP檢測(cè)引物及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310235532.2
• 申請(qǐng)日: 2023-03-13
• 公開（公告）號(hào): CN116240308A
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅鵬;呂穎;張?chǎng)?/a>;何熙平;胡超群;王艷紅;任春華;陳廷;江曉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣

1.一種與凡納濱對(duì)蝦抗肝腸胞蟲性狀相關(guān)的分子標(biāo)記組合，其特征在于，位于凡納濱對(duì)蝦基因組未特征化基因LOC113820209上游P₃₅₈位點(diǎn)和P₃₃₉位點(diǎn)，所述的P₃₅₈位點(diǎn)位于凡納濱對(duì)蝦基因組Scaffold片段NW_020870611.1第549245堿基，所述堿基為C/T；所述的P₃₃₉位點(diǎn)位于凡納濱對(duì)蝦基因組Scaffold片段NW_020870611.1第549264堿基，所述堿基為T/C；

當(dāng)P₃₅₈位點(diǎn)和P₃₃₉位點(diǎn)的基因型組合為T/T、C/C時(shí)，凡納濱對(duì)蝦對(duì)肝腸胞蟲抗性較強(qiáng)，當(dāng)P₃₅₈位點(diǎn)和P₃₃₉位點(diǎn)的基因型組合為其它類型時(shí)，凡納濱對(duì)蝦對(duì)肝腸胞蟲敏感。

2.用于擴(kuò)增權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記組合的引物組，其特征在于，所述的引物組由檢測(cè)P₃₅₈位點(diǎn)基因型的引物組和檢測(cè)P₃₃₉位點(diǎn)基因型的引物組組成；

所述檢測(cè)P₃₅₈位點(diǎn)基因型的引物組如下：

549245F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGGTACAAGGAAAGGAACAGGGACC；

549245F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGGTACAAGGAAAGGAACAGGGACT；

549245R：GGTAACTCCGTGCATCAACAAGACTGTAT；

所述檢測(cè)P₃₃₉位點(diǎn)基因型的引物組如下：

549264F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGGACCGTGTCTTATACAGTCTTGT；

549264F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGGACCGTGTCTTATACAGTCTTGC；

549264R：CCATTTTCTGTTTCTCGGTAACTCCGTGC。

3.權(quán)利要求2所述的引物組在制備凡納濱對(duì)蝦肝腸胞蟲抗性性狀檢測(cè)的試劑盒中的應(yīng)用。

4.一種試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求2所述的引物組。

5.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記組合、權(quán)利要求2所述的引物組或權(quán)利要求4所述的試劑盒在凡納濱對(duì)蝦肝腸胞蟲抗性性狀分子檢測(cè)中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記組合、權(quán)利要求2所述的引物組或權(quán)利要求4所述的試劑盒在凡納濱對(duì)蝦分子遺傳育種中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，是在凡納濱對(duì)蝦肝腸胞蟲抗性育種中的應(yīng)用。

8.一種檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦肝腸胞蟲抗性性狀的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)獲得待測(cè)樣品基因組DNA；

(2)以基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求2所述的引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(3)收集每個(gè)反應(yīng)孔產(chǎn)生的熒光信號(hào)，根據(jù)熒光信號(hào)的類型判斷分子標(biāo)記的基因型，進(jìn)而確定凡納濱對(duì)蝦對(duì)肝腸胞蟲的抗性。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，對(duì)P₃₅₈位點(diǎn)進(jìn)行基因型的熒光檢測(cè)：

若僅檢測(cè)到FAM熒光，則P₃₅₈位點(diǎn)為C/C純合基因型；

若僅檢測(cè)到HEX熒光，則P₃₅₈位點(diǎn)為T/T純合基因型；

若同時(shí)檢測(cè)到FAM和HEX熒光，則P₃₅₈位點(diǎn)為C/T雜合子。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，對(duì)P₃₃₉位點(diǎn)進(jìn)行基因型的熒光檢測(cè)：

若僅檢測(cè)到FAM熒光，則P₃₃₉位點(diǎn)為T/T純合基因型；

若僅檢測(cè)到HEX熒光，則P₃₃₉位點(diǎn)為C/C純合基因型；

若同時(shí)檢測(cè)到FAM和HEX熒光，則P₃₃₉位點(diǎn)為T/C雜合子。