[發(fā)明專利]與南瓜蔗糖含量主效QTL連鎖的KASP分子標(biāo)記及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310223003.0
• 申請(qǐng)日: 2023-03-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116411118A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐穎超;鐘玉娟;薛舒丹;朱吉童;孟琦濤;張思程
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京盛廣信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 16117
• 代理人: 李娜

1.一種與南瓜蔗糖含量主效QTL連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記為分子標(biāo)記347798和分子標(biāo)記347840中的一種或多種；所述分子標(biāo)記347798的核苷酸序列如SEQ?IDNO：1所示，所述分子標(biāo)記347840的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

所述分子標(biāo)記347798和分子標(biāo)記347840定位于南瓜15號(hào)染色體上，且均位于8201165-8236299bp區(qū)段內(nèi)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記347798和分子標(biāo)記347840的第151bp處均有一個(gè)T/C堿基突變。

3.一種檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記的KASP引物組，其特征在于，檢測(cè)分子標(biāo)記347798的KASP引物組包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示的上游引物、核苷酸序列如SEQID?NO：4所示的第一下游引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示的第二下游引物；

檢測(cè)分子標(biāo)記347840的KASP引物組包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示的第一下游引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO：8所示的第二下游引物。

4.一種權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記的檢測(cè)試劑或檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求3所述的KASP引物組。

5.一種權(quán)利要求1或2所述的分子標(biāo)記、權(quán)利要求3所述的KASP引物組或權(quán)利要求4所述的檢測(cè)試劑或檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，用于如下任一項(xiàng)應(yīng)用中：

(1)鑒定南瓜蔗糖含量；

(2)篩選高低蔗糖含量的南瓜品種或品系；

(3)南瓜分子標(biāo)記輔助育種；

(4)改良南瓜種質(zhì)資源。

6.一種鑒定南瓜蔗糖含量高低的方法，其特征在于，包括如下步驟：

以待測(cè)南瓜樣品的基因組DNA作為模板，利用權(quán)利要求3所述的KASP引物組或權(quán)利要求4所述的檢測(cè)試劑或檢測(cè)試劑盒對(duì)模板進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，利用擴(kuò)增結(jié)果判斷南瓜蔗糖含量高低。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，若擴(kuò)增結(jié)果顯示權(quán)利要求1或2中所述分子標(biāo)記347798的堿基突變?yōu)镃或分子標(biāo)記347840的堿基突變?yōu)門(mén)時(shí)，則判斷待測(cè)南瓜樣品蔗糖含量高。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR擴(kuò)增的程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性15min，94℃變性20s，65-75℃梯度復(fù)性/延伸1min，10個(gè)循環(huán)；94℃變性20s，57℃復(fù)性/延伸1min，30個(gè)循環(huán)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR擴(kuò)增的體系為：2×PARMSmastermix5μL，上游引物0.15μL，第一下游引物0.15μL，第二下游引物0.15μL和DNA模板10-100ng，總體積為10μL。