[發(fā)明專利]肺癌相關基因高通量擴增子文庫的制備方法、多重PCR引物對及應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202310210609.0 | 申請日： | 2022-12-02 |
| 公開（公告）號： | CN116024308A | 公開（公告）日： | 2023-04-28 |
| 發(fā)明（設計）人： | 相學平;范賢;楊金龍;杜江麗;鄭云飛;張文靜;牛紅梅;王諾 | 申請（專利權(quán)）人： | 杭州布平醫(yī)學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12N15/11;C12Q1/6886;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 張金銘 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市錢塘新*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 肺癌 相關 基因 通量 擴增 文庫 制備 方法 多重 pcr 引物 應用 | ||
1.肺癌相關基因擴增子文庫的制備方法，其特征在于，使用多重PCR方法對樣本中的肺癌相關基因進行擴增，而后僅經(jīng)過一步純化獲得擴增子文庫；
所述多重PCR使用的引物對包括如下上游引物和下游引物：
上游引物的核苷酸序列從5’端至3’端依次為：5’-正向接頭序列-標簽序列1-正向測序引物序列-肺癌相關基因擴增的特異性正向引物序列-3’；
下游引物的核苷酸序列從5’端至3’端依次為：5’-反向接頭序列-標簽序列2-反向測序引物序列-肺癌相關基因擴增的特異性反向引物序列-3’；
所述標簽序列1和標簽序列2為互相不同的6～10bp的核苷酸片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述正向接頭序列如SEQ?ID?No：1所示；所述反向接頭序列如SEQ?ID?No：2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述正向測序引物序列如SEQ?ID?No：3所示；所述反向測序引物序列如SEQ?ID?No：4所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的制備方法，其特征在于，所述上游引物和/或下游引物的5’端具有磷酸化修飾。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，同一樣本的肺癌相關基因的數(shù)量≥1；
優(yōu)選地，同一樣本中肺癌相關基因的數(shù)量＞1，不同肺癌相關基因所使用的上游引物和下游引物具有相同的標簽序列組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，不同樣本所使用的上游引物和下游引物具有不同的標簽序列組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述樣本包括來源于全血、血漿、唾液、組織、福爾馬林固定樣本、石蠟包埋樣本或穿刺樣本中的DNA樣本或RNA樣本。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述多重PCR反應程序依次包括：
98℃下反應5min循環(huán)1次；
98℃下反應10s，60℃下反應15s，72℃下反應20s，并循環(huán)30次；
72℃下反應5min，循環(huán)1次；
4℃下保溫，循環(huán)1次；
所述多重PCR反應的體系包括，PCR反應預混液、引物混合物、DNA模板和無酶水。
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