[發明專利]一種6-唾液酸轉移酶突變體及其應用在審
| 申請號： | 202310176521.1 | 申請日： | 2023-02-28 |
| 公開（公告）號： | CN116334020A | 公開（公告）日： | 2023-06-27 |
| 發明（設計）人： | 柳東;王偉祎;鄭誠;應漢杰;莊偉;王志;劉金樂 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學;鄭州大學 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/18;C12P19/26;C12P19/38;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210009 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 唾液酸 轉移酶 突變體 及其 應用 | ||
1.一種6'-唾液酸轉移酶突變體，其特征在于，所述的突變體是由核苷酸序列為SEQIDNO:1的野生型6'-唾液酸轉移酶突變而來，其中，所述的突變是將第449位亮氨酸突變成丙氨酸。
2.根據權利要求1所述的6'-唾液酸轉移酶突變體，其特征在于，所述的6'-唾液酸轉移酶突變體，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:5所示。
3.編碼要求權利求2所述的6'-唾液酸轉移酶突變體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9所示。
4.一種重組載體，其特征在于，含有權利要求3所述的6'-唾液酸轉移酶突變體的核苷酸序列。
5.一種宿主細胞，其特征在于，含有權利要求4所述的重組載體或權利要求3所述的6'-唾液酸轉移酶突變體的核苷酸序列。
6.權利要求1-3所述的6'-唾液酸轉移酶突變體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)構建包含所述6'-唾液酸轉移酶的編碼基因的重組質粒，所述重組質粒以大腸桿菌為宿主；
(2)以步驟(1)構建的重組質粒為模板，利用帶有突變位點的寡聚核苷酸序列為引物對，通過環狀PCR擴增得到包含有SEQ?ID?NO:5所示的堿基序列的PCR產物，之后將PCR產物采用DpnI酶消化模板，得到環狀重組質粒；
(3)將步驟(2)得到的環狀重組質粒轉化至宿主細胞BL21(DE3)感受態細胞中，獲得含有6'-唾液酸轉移酶突變體的基因工程菌。
7.權利要求1-3所述的6'-唾液酸轉移酶突變體在生產制備唾液酸乳糖中的應用。
8.權利要求1-3所述的6'-唾液酸轉移酶突變體在CTP異位再生體系中的應用。
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