[發明專利]中和性抗Fn14單抗及其在制備防治銀屑病藥物中的應用

在審

• 申請號: 202310170585.0
• 申請日: 2023-02-27
• 公開（公告）號: CN116102650A
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 夏育民;羅邁;劉亞樂;任凱旋;馮榮芳;王繪霞
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K39/395;A61P17/06
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 崔方方

本發明公開了中和性抗Fn14單抗及其在制備防治銀屑病藥物中的應用，屬于抗體藥物制備技術領域。采用免疫增強因子cpG?ODN，提高B細胞表面抗原遞呈相關分子的表達；將Fn14多肽抗原和病毒載體進行偶聯，獲得效價更高的抗體。該抗體可競爭性結合Fn14蛋白，阻斷TWEAK與受體Fn14的結合，抑制下游反應中促炎因子和趨化因子的表達。通過實驗發現該中和性抗Fn14單抗能夠使小鼠表皮變薄，角化過度、角化不全較輕微，顆粒層增多，組織細胞、淋巴細胞浸潤、真皮淺層毛細血管擴張、充血等癥狀表現得到不同程度改善，同時對血常規和肝腎功能基本無影響，安全性好，能夠應用于防治銀屑病藥物的制備中。

技術領域

本發明屬于抗體藥物制備技術領域，具體涉及中和性抗Fn14單抗及其在制備防治銀屑病藥物中的應用。

背景技術

銀屑病是一種由遺傳因素和環境因素共同引起的慢性炎癥性免疫性皮膚病，主要病理特征為角質形成細胞異常增殖導致的表皮增生和真皮炎癥細胞浸潤。典型表現為邊界清楚的紅斑，表面覆有銀白色鱗屑，病理表現為角化過度或角化不全，常累及頭皮和四肢伸側，也可累及手掌、足底、指甲、生殖器等部位。該病在歐美國家的發病率約為2％～3％，我國銀屑病發病率約為0.46％。銀屑病發病機制較復雜，涉及血管增生遷移、天然T細胞分化、炎癥細胞浸潤和角質形成細胞分化異常等多個環節。主要機制為樹突狀細胞受刺激后產生腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-23等細胞因子，IL-23刺激Th17細胞產生IL-17與IL-22，通過Janus激酶/信號轉導與轉錄激活子通路(JAK-STAT3)通路與TNF-α共同作用于表皮角質形成細胞，導致銀屑病的各種表現。

目前臨床上治療銀屑病的常用藥物包括糖皮質激素類、維生素D3衍生物、維A酸類、鈣調磷酸酶抑制劑、地蒽酚、焦油制劑以及聯合治療等方式。但是長期使用皮質類固醇激素會引起皮膚萎縮、功效喪失，維生素D類藥物雖然副作用小，但其缺點是具有光敏性、易引起高鈣血癥等，因此限制了這些藥物在臨床的使用。生物制劑也是目前銀屑病治療的研究熱點，目前常見的生物藥主要是靶向TNF-α、IL-23/Th17軸以及CD分子的藥物，治療效果雖然相對傳統藥物有優勢，但臨床結果顯示部分抗體安全性較差。因而迫切需要一種安全性好、能夠有效改善銀屑病的藥物。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供中和性抗Fn14單抗及其在制備防治銀屑病藥物中的應用，作為安全性更好、能夠有效改善銀屑病的藥物。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明公開了中和性抗Fn14單抗，將Fn14抗原和病毒載體偶聯后作為免疫原免疫動物，取動物脾細胞與SP2/0進行細胞融合，經亞克隆篩選、細胞建株、體內誘生腹水法制備得到中和性抗Fn14單抗；其中，所述Fn14抗原的氨基酸序列如SEQ.ID.1所示。

優選地，所述病毒載體為鑰孔血藍蛋白。

優選地，所述動物為BALB/c小鼠。

進一步優選地，Fn14多肽抗原與鑰孔血藍蛋白通過SMCC進行偶聯。

優選地，所述免疫原中還添加有CpG?ODN，所述CpG?ODN的核苷酸序列如SEQ.ID.2所示。

進一步優選地，所述免疫原包括初免抗原、二免抗原、三免抗原、四免抗原和五免抗原；初免抗原由偶聯后的Fn14抗原與等體積加入CpG?ODN的弗氏完全佐劑混勻乳化得到，二免抗原、三免抗原和四免抗原均由偶聯后的Fn14抗原與等體積加入CpG?ODN的弗氏不完全佐劑混勻乳化得到，五免抗原由偶聯后的Fn14抗原與等體積生理鹽水混合得到。

本發明還公開了上述中和性抗Fn14單抗在制備防治銀屑病藥物中的應用。

優選地，所述藥物在基因水平/蛋白水平以Fn14作為藥物靶點。

優選地，所述中和性抗Fn14單抗的動物給藥量為1～10mg/kg。