[發明專利]一種肺癌免疫治療耐藥細胞系及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202310167072.4
• 申請日: 2023-02-27
• 公開（公告）號: CN116121194B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 陳大衛;王飛;尚士潔;王瑞陽;張晶鑫
• 申請（專利權）人: 山東第一醫科大學附屬腫瘤醫院（山東省腫瘤防治研究院;山東省腫瘤醫院）
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 程小芳

本發明公開了一種肺癌免疫治療耐藥細胞系及其制備方法和應用，屬于生物醫藥領域。所述肺癌免疫治療耐藥細胞系已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2023年1月8日，保藏編號為CCTCCNO:C202307。通過細胞功能學實驗，發現該耐藥細胞系體外增殖、遷移能力不變；小鼠荷瘤實驗發現，該耐藥細胞系體內增殖能力增強且對PD?1抗體治療的耐受性顯著增加，可用于深入研究肺癌PD?1抗體治療耐藥的分子機制及開發相關抗腫瘤藥物，為篩選肺癌PD?1抗體治療耐藥的分子標志物、設計和評估新型抗腫瘤藥物以及開發新的腫瘤治療方案等提供新材料。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，特別是涉及一種肺癌免疫治療耐藥細胞系及其制備方法和應用。

背景技術

原發性肺癌是我國最常見的惡性腫瘤。其中非小細胞肺癌(non?small?cell?lungcancer，NSCLC)約占80％～85％，其余為小細胞肺癌(small?cell?lung?cancer，SCLC)。肺癌在中國的發病率和死亡率均位于惡性腫瘤中的第1位。由于早期肺癌多無明顯癥狀，臨床上多數患者出現癥狀就診時已屬晚期，而晚期肺癌患者整體5年生存率不高。AJCC第8版腫瘤分期手冊報道的對94703例NSCLC患者的統計分析結果顯示，Ⅳ期肺癌患者的5年生存率僅為不到5％，中位生存期只有7個月。

晚期肺癌的治療目前以放療、化療為主。晚期NSCLC對于驅動基因陰性的患者，含鉑的兩藥聯合方案是標準的一線化療方案。近年，以免疫檢查點抑制劑(如PD-1單抗等)為代表的免疫治療已被證實可改善肺癌患者的生存率。2022版原發性肺癌診療指南中建議晚期肺癌可行卡瑞利珠(PD-1單抗)，帕博利珠(PD-1單抗)、替雷利珠(PD-1單抗)，信迪利(PD-1單抗)或阿替利珠(PD-L1單抗)聯合培美曲塞為基礎的含鉑兩藥化療。

雖然免疫治療近些年來發展迅速，但我們不得不面對的問題是：1.免疫治療的響應率不高。僅少數腫瘤具備高響應率：如霍奇金淋巴瘤(87％)，黑色素瘤(40％-70％),而NSCLC響應率卻極低(僅20％)。2.部分患者用藥后不久發生耐藥，甚至是在一些初始反應良好的患者通過獲得性耐藥導致腫瘤復發。總體而言，已經明確PD-1單抗對晚期肺癌具有確切的治療效果，但其治療效果仍然受耐藥問題的限制。

目前針對PD-1抗體的耐藥研究主要涉及的內在機制主要為：MAPK通路、PI3K信號通路、WNT/β-catenin信號通路、IFN-γ信號通路等。隨著免疫治療耐藥的發生，研究更為有效的藥物靶點就顯得尤為重要。而目前尚無對PD-1抗體耐藥的肺癌細胞株。因此，構建PD-1抗體耐藥的肺癌細胞株顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供一種肺癌免疫治療耐藥細胞系及其制備方法和應用，以解決上述現有技術存在的問題。本發明獲得的耐藥細胞系具有穩定的PD-1抗體耐藥性，體外增殖、遷移能力不變，具有較高的科研和臨床應用價值。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種肺癌免疫治療耐藥細胞系CMT167-R，所述耐藥細胞系CMT167-R已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2023年1月8日，保藏編號為CCTCC?NO:C202307。

進一步地，所述耐藥細胞系CMT167-R的構建方法包括以下步驟：

(1)利用肺癌細胞系CMT167構建小鼠皮下瘤模型，給予免疫檢查點PD-1抗體治療，篩選治療后體積最大的腫瘤；

(2)無菌條件下分離篩選得到的體積最大的腫瘤組織，剪碎后在培養基中培養并傳代，獲得腫瘤原代細胞，利用所述腫瘤原代細胞繼續構建小鼠皮下瘤模型，給予免疫檢查點PD-1抗體治療，篩選治療后體積最大的腫瘤；

(3)重復步驟(2)直至免疫檢查點PD-1抗體治療組的腫瘤體積與對照組相比無顯著差異，篩選免疫檢查點PD-1抗體治療組體積最大的腫瘤；