[發明專利]一株兔源丁酸梭菌CW3及其分離篩選方法和應用

在審

• 申請號: 202310154829.6
• 申請日: 2023-02-23
• 公開（公告）號: CN116606754A
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 劉磊;王春陽;陳文潔;李福昌
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/742;A61P31/04;A61P1/12;A23K10/18;A23K50/60;C12R1/145
• 代理公司: 濟南魯科專利代理有限公司 37214
• 代理人: 滕慧

本發明涉及獸醫微生物技術領域,尤其涉及一種兔源丁酸梭菌CW3及其分離篩選方法和應用。該兔源丁酸梭菌CW3(保藏編號：CGMCC?No.26406，保藏日期：2023年1月6日，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心)具有較強的產丁酸和抑菌性能，并具有良好的安全性和耐受性，能夠降低斷奶仔兔的死亡率、預防仔兔腹瀉并保護動物腸道健康，在兔業養殖中具有廣闊的前景。

技術領域

本發明涉及獸醫微生物技術領域，尤其涉及一株兔源丁酸梭菌CW3及其分離篩選方法和應用。

背景技術

2020年起，抗生素被禁止用于飼料添加使用。而在眾多的替抗產品中，微生態制劑因其安全性和有效性而備受關注。家兔產業在我國近年來發展迅速，斷奶仔兔腹瀉一直是養兔業中的一個難題，而目前市場上的眾多益生菌類多來源于人豬雞，很少有直接來源于兔的，再加上兔腸道的特殊性，因此微生態制劑在兔業中的發展受到限制。因此，尋找安全、抗菌性強、抑菌譜廣的益生菌是改善仔兔腹瀉的一個重要方向。

丁酸梭菌是一種專性厭氧的革蘭氏陽性梭狀芽孢桿菌，主要存在于人和動物的消化道、土壤以及窖泥中。丁酸梭菌能夠產生多種營養物質和短鏈脂肪酸等，能夠維持腸道菌群平衡、增強腸道免疫。此外，相比于乳酸菌和雙歧桿菌等常見益生菌來說，丁酸梭菌可產生內生孢子，對外界環境和動物消化道環境具有較強的耐受性，因此，被認為是優質的益生菌。丁酸梭菌作為飼料添加劑，可促進動物生長發育，提升動物生產性能，增強機體免疫功能，對沙門氏菌和產氣莢膜梭菌等多種致病菌引起的感染具有較強的保護作用。

丁酸梭菌在動物腸道內產生的乙酸、丁酸等短鏈脂肪酸能夠被腸道細胞直接利用，是腸道動力的直接來源。丁酸梭菌分泌的有機酸可以使腸腔pH值下降，抑制病原微生物的繁殖，減少腸道毒素，降低腹瀉發生率。丁酸梭菌能夠促進雙歧桿菌和乳桿菌等腸道益生菌的增殖，抑制大腸桿菌和產氣莢膜梭菌等致病菌的生長，對畜禽腸道屏障功能具有良好的修復和增強效果，可以作為飼用微生態制劑，在畜禽養殖業中具有良好的應用潛力。目前丁酸梭菌的報道多分離自人、雞和豬的腸道，但來源于家兔腸道的分離還較少。家兔屬于單胃食草性動物，盲腸發達。由于家兔特殊的盲腸結構及“食糞性”的特點，其腸道內的微生物必演化出自己獨特的代謝途徑，其腸道微生物也會別于其他來源的微生物。

發明內容

本發明提供了一株兔源丁酸梭菌CW3及其分離篩選方法和應用，該兔源丁酸梭菌CW3經鑒定為丁酸梭菌(Clostridium?butyricum)，具有較強的產丁酸和抑菌性能，并具有良好的安全性和耐受性，能夠降低斷奶仔兔的死亡率、預防仔兔腹瀉并保護動物腸道健康，在兔業養殖中具有廣闊的前景，解決了現有技術中存在的問題。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案之一是：

一株兔源丁酸梭菌CW3，分類命名為：丁酸梭菌(Clostridium?butyricum)CW3，已于2023年1月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號：CGMCCNo.26406，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路一號院三號中國科學院微生物研究所。

本發明采用的技術方案之二是：

一株兔源丁酸梭菌CW3的分離篩選方法，包括如下步驟：

(1)兔源丁酸梭菌的分離純化：

將采集的肉兔糞便樣品加入生理鹽水中，搖床過夜，收集懸液，水浴處理后，用RCM培養基(強化梭菌培養基)從樣品中分離出耐熱菌株，通過平板劃線法純化菌株；對純化后菌株進行革蘭氏染色實驗，選取革蘭氏染色為陽性的菌株；

(2)兔源丁酸梭菌的鑒定：將分離純化的菌落分別加入生化鑒定管中反應，選擇生化鑒定結果符合《伯杰細胞鑒定手冊》中對丁酸梭菌的描述的菌株；進行了微生物質譜鑒定及16SrRNA鑒定，選擇結果顯示為丁酸梭菌的菌落；

(3)兔源丁酸梭菌的篩選：