[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗PEG-EPO的抗藥抗體的方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310150592.4
• 申請(qǐng)日: 2023-02-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116337969A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐麗;胥永標(biāo);許波;徐天揚(yáng);劉海峰;解福生;郝向慧;王菲;楊延茹;賀新新
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華潤(rùn)昂德生物藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/327
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/327;G01N27/416;G01N21/76
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.一種基于電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗PEG-EPO的抗藥抗體的方法，其特征在于，所述方法包括：將Bio-drug溶液加入鏈霉親和素包被的MSD板后，通過(guò)生物素與鏈霉素的作用被固定在MSD中，待測(cè)樣品經(jīng)過(guò)稀釋處理后，加入SA-MSD板中，抗體被SA-MSD板中的Bio-drug抓取，再將Sulfo-Tag標(biāo)記的PEG-EPO加入板上與抗體結(jié)合；最終，Sulfo-Tag激發(fā)電化學(xué)光，信號(hào)值強(qiáng)度與抗PEG-EPO的抗藥抗體強(qiáng)度成正比；所述Bio-drug為生物素修飾的PEG-EPO，其濃度為0.1-1μg/mL。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述“將Bio-drug溶液加入鏈霉親和素包被的MSD板后，通過(guò)生物素與鏈霉素的作用被固定在MSD中”的步驟具體為：將Bio-drug溶液加入SA-MSD板，封板膜封板，在20-30℃孵育60-66分鐘，搖板機(jī)轉(zhuǎn)速為500-1000rpm。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述SA-MSD板在使用前使用牛血清白蛋白進(jìn)行封閉處理，然后使用清洗緩沖液進(jìn)行清洗。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述清洗緩沖液為含有表面活性劑的PBS緩沖液，其中所述表面活性劑為吐溫20，所述吐溫20的含量為0.01-0.1％(v/v)。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)樣品稀釋具體方法包括：將待測(cè)樣品完全融化并渦旋處理后加入稀釋板，封板膜封板，在20-30℃孵育10-30分鐘，搖板機(jī)轉(zhuǎn)速為500-1000rpm。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)樣品為受試者血液樣品，更具體為受試者血清樣品。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，稀釋后的待測(cè)樣品加入SA-MSD板的具體步驟包括將稀釋后的待測(cè)樣品從稀釋板中轉(zhuǎn)移至SA-MSD板，封板膜封板，在20-30℃孵育60-66分鐘，搖板機(jī)轉(zhuǎn)速為500-1000rpm；

待測(cè)樣品的最小稀釋倍數(shù)為5倍。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述“將Sulfo-Tag標(biāo)記的PEG-EPO加入板上與抗體結(jié)合”的步驟具體方法包括：

將所述Sulfo-Tag標(biāo)記的PEG-EPO轉(zhuǎn)至SA-MSD板，在20-30℃孵育60-70分鐘，搖板機(jī)轉(zhuǎn)速為500-1000rpm；

所述Sulfo-Tag激發(fā)電化學(xué)光的激發(fā)光波長(zhǎng)為620nm。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括陽(yáng)性質(zhì)控樣品和陰性質(zhì)控樣品，其中陽(yáng)性質(zhì)控樣品(單克隆鼠抗促紅細(xì)胞生成素)分為高、中、低三濃度陽(yáng)性質(zhì)控樣品，其濃度分別為5000ng/mL、2500ng/mL和32.91ng/mL。

10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述檢測(cè)方法在PEG-EPO藥物評(píng)價(jià)中的應(yīng)用；

進(jìn)一步的，所述PEG-EPO藥物評(píng)價(jià)具體為PEG-EPO免疫原性評(píng)價(jià)。