[發明專利]一種確定PCR擴增循環數的方法

在審

• 申請號: 202310145266.4
• 申請日: 2023-02-21
• 公開（公告）號: CN116287157A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 鄧琪;冀少卿;李奇;施玉健;邱順芳;魏夢輝;陳欣
• 申請（專利權）人: 北京吉因加醫學檢驗實驗室有限公司;北京吉因加科技有限公司;上海吉因加醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6806;C40B50/06
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 周建軍;彭家恩

1.一種確定PCR擴增循環數的方法，其特征在于，包括按如下公式確定樣本的PCR擴增循環數：

擴增循環數y＝DV200*(-4.5223)+lg(RNA起始投入量)*(-3.5)+K；

K為26.7821或28.7821；

所述擴增循環數y以四舍五入的方式取整數。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，當樣本中RNA的DV20020％時，擴增循環數y＝DV200*(-4.5223)+lg(RNA起始投入量)*(-3.5)+26.7821，所述擴增循環數y以四舍五入的方式取整數；

當樣本中RNA的DV200≤20％時，擴增循環數y＝DV200*(-4.5223)+lg(RNA起始投入量)*(-3.5)+28.7821，所述擴增循環數y以四舍五入的方式取整數。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PCR擴增后，如果樣本中的文庫濃度X≤12ng/μL，則進行再次擴增。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PCR擴增后，如果樣本中的文庫濃度X＞12ng/μL，則不進行再次擴增。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PCR擴增后，如果樣本中的文庫濃度X為0≤X3ng/μL，再次擴增的循環數為3。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PCR擴增后，如果樣本中的文庫濃度X為3≤X7.5ng/μL，再次擴增的循環數為2。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PCR擴增后，如果樣本中的文庫濃度X為7.2≤X12ng/μL，再次擴增的循環數為1。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增是指在使用探針進行雜交捕獲之前的擴增；

或，所述PCR擴增是指上機測序之前的擴增；

或，所述PCR擴增之后，獲得可用于保存或上機測序的樣本；

或，所述樣本為用于全轉錄組測序的樣本；

或，用于擴增的樣本是由RNA逆轉錄得到的DNA樣本；

或，所述樣本為RNA依次經過一鏈合成、二鏈合成后得到的DNA樣本；

或，用于擴增的樣本提取自體液樣本或組織樣本；

或，用于擴增的樣本依次經過rRNA去除、一次純化、RNA片段化及變性、一鏈合成、二鏈合成、二次純化、末端修復及加“A”反應、接頭連接、酶消化、三次純化；

或，所述rRNA去除包括依次經過探針雜交、核糖核酸酶消化、脫氧核糖核酸酶消化；

或，還包括對擴增后的樣本進行純化，獲得純化后的樣本。

9.一種文庫構建方法，其特征在于，包括：

擴增步驟，包括按照權利要求1～8任意一項所述的方法所確定的循環數，對預處理的樣本進行PCR擴增，獲得擴增后的樣本，即為所述文庫。

10.如權利要求9所述的方法構建得到的文庫。