[發明專利]一種常溫保存土壤的保存液及其配制方法

在審

• 申請號: 202310143833.2
• 申請日: 2023-02-21
• 公開（公告）號: CN116287114A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 毛豐;殷劍峰;王春香
• 申請（專利權）人: 江蘇康為世紀生物科技股份有限公司;泰州健為醫學檢驗實驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

本發明涉及一種常溫保存土壤的保存液及其配制方法，屬于土壤微生物保存技術領域。本發明的常溫保存土壤的保存液，含有如下組分：離液劑、螯合劑、鹽離子平衡劑、阻斷劑、核酸保護劑和水；所述保存液的pH為7.5?9.5；所述離液劑包括硫氰酸鹽、胍鹽和表面活性劑；所述硫氰酸鹽選自硫氰酸鈉、硫氰酸銨、硫氰酸鉀、硫氰酸鋰中的任意一種或幾種的組合；所述的硫氰酸鹽在保存液中的濃度為0.1?0.5M；所述胍鹽選自硫酸胍、異硫酸氰胍中的任意一種或幾種的組合；所述的胍鹽在保存液中的濃度為0.1?0.5M；所述表面活性劑選自SDS、Tween?20、PVP中的任意一種或幾種的組合。用本發明的保存液處理土壤樣本，可有效保持土壤樣本中的微生物基因組DNA核酸穩定，并且有利于土壤微生物核酸提取。

技術領域

本發明涉及一種常溫保存土壤的保存液及其配制方法，屬于土壤微生物保存技術領域。

背景技術

近些年來，微生物組學研究受到越來越多的關注與重視。其中，對于土壤微生物的研究也逐漸受到科研人員的青睞，其中對土壤中微生物進行測序分析對于微生物研究至關重要，而在測序分析前需要對土壤微生物進行提取，能否獲取高質量的核酸是進行測序等研究的基礎。

利用鮮活材料或超低溫凍存樣本進行核酸提取往往是獲取高質量核酸的兩種重要方式。但是對于偏遠地區進行土壤樣本的采集與提取或進行超低溫凍存均存在很多不方便的地方。因此，若能將剛采集的新鮮土壤樣本裝入保存液內進行常溫保存，等到實驗室內再進行核酸提取等操作，將極大的提高樣本保存提取效率。

截至目前，市面上并未有土壤微生物保存液，且暫時沒有報道與土壤保存液相關的專利。

中國專利CN110004212A，提供了糞便保存液及其制備方法和保存糞便的方法，糞便保存液包括：三羥甲基氨基甲烷(Tris?base)0.10-0.20M；乙二胺四乙酸(EDTA)0.25-0.75M；氯化鈉(NaCl)10mM，常溫飽和；二甲基亞砜(DMSO)5-15％；乙醇2.5-10％；甘油5-20％。其中的二甲基亞砜與甘油的組合更適合抑制物較少的菌液的保存，而不適用于土壤、糞便這些富含抑制物的樣本類型的保存。

對于其他的現有技術，發明人發現，目前現有技術主要存在如下技術問題：對糞便與土壤等抑制物含量高的樣本保存時，使用的離液鹽主要是胍鹽，胍鹽含量較高時，不利于提取的核酸純度，使得提取的核酸純度降低，不利于PCR擴增測序等。另外沒有核酸保護劑，可能不利于樣本的長期保存；另外土壤中一些抑制物可能在提取微生物DNA時與結合液競爭性相結合，不利于后續微生物核酸提取。

基于上述背景，需要一種適用于常溫保存土壤的保存液及其配制方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，提供一種能夠在常溫下長時間有效保存土壤核酸的土壤保存液及其配制方法。

發明人基于現有技術存在的技術問題，進行了如下改進：減少胍鹽用量，使用硫氰酸鹽；加入核酸保護劑；加入阻斷劑，提供了一種能夠在常溫下長時間有效保存土壤核酸的土壤保存液及其配制方法。

本發明解決技術問題的技術方案如下：

在本發明的第一方面，提供了一種常溫保存土壤的保存液。

所述保存液，含有如下組分：離液劑、螯合劑、鹽離子平衡劑、阻斷劑、核酸保護劑和水；所述保存液的pH為7.5-9.5；所述保存液pH優選為8.0。

所述離液劑包括硫氰酸鹽、胍鹽和表面活性劑；

所述硫氰酸鹽選自硫氰酸鈉、硫氰酸銨、硫氰酸鉀、硫氰酸鋰中的任意一種或幾種的組合；所述的硫氰酸鹽在保存液中的濃度為0.1-0.5M；

所述胍鹽選自硫酸胍、異硫酸氰胍中的任意一種或幾種的組合；所述的胍鹽在保存液中的濃度為0.1-0.5M；