本發(fā)明公開了一種檢測(cè)血漿中頭孢他啶和阿維巴坦?jié)舛鹊姆椒ǎ唧w屬于血液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，該方法包括如下步驟：在待檢測(cè)的血漿樣本中加入蛋白沉淀劑，經(jīng)渦旋混勻、離心后得到上清液，并用氮?dú)獯抵粮桑淮蹈蓸颖窘?jīng)濃度為5％甲醇溶液復(fù)溶，渦旋混勻后，得到待測(cè)液；待測(cè)液經(jīng)超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，得到頭孢他啶及阿維巴坦的色譜峰面積。利用外標(biāo)法，將頭孢他啶和阿維巴坦的色譜峰面積代入已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，即可得到血漿中頭孢他啶和阿維巴坦的濃度。本發(fā)明提供的方法具有準(zhǔn)確度高、靈敏性好、樣品處理簡單以及高效的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于血液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)血漿中頭孢他啶和阿維巴坦?jié)舛鹊姆椒ā?/p>

背景技術(shù)

隨著抗菌藥物耐藥性的增加，新藥的研發(fā)刻不容緩。在2021年CHINET中國細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)中，共收集臨床分離株301917株,其中革蘭陰性菌占71.4％,革蘭陽性菌占28.6％，多重耐藥革蘭氏陰性菌的檢出率呈快速上升趨勢(shì)。

新型的抗菌藥物頭孢他啶/阿維巴坦在2015年2月，獲得美國食品和藥物管理局(FDA)的批準(zhǔn)在美國上市。頭孢他啶/阿維巴坦(CAZ/AVI)是一種新型的β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑組合藥物，頭孢他啶是第三代廣譜頭孢菌素，與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合后抑制細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖合成，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞裂解和死亡，具有抑制腸桿菌科細(xì)菌和銅綠假單胞菌活性。阿維巴坦具有獨(dú)特的作用方式，與酶形成緩慢可逆的共價(jià)鍵，能抑制A類、C類和部分D類β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs、KPCs、OXA-48和AmpC)，在國內(nèi)被批準(zhǔn)用于治療患有復(fù)雜性腹腔內(nèi)感染(cIAI)、醫(yī)院獲得性肺炎和呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎(HAP/VAP)以及在治療方案選擇有限時(shí)對(duì)本品敏感的格蘭陰性菌引起感染的成人患者。阿維巴坦與頭孢他啶一樣，主要由腎臟原型排出，因?yàn)槟I功能受損可能影響藥物的清除，并因此影響藥物血漿暴露。目前與CAZ/AVI相關(guān)的嚴(yán)重不良事件包括腹瀉、急性腎功能衰竭、肝酶水平升高等，盡管目前未觀察到神經(jīng)精神癥狀，但多年的頭孢他啶臨床經(jīng)驗(yàn)表明，神經(jīng)毒性也應(yīng)考慮，特別是腎功能減退的患者。

對(duì)于接受頭孢他啶/阿維巴坦治療的患者，尤其對(duì)腎功能不全的危重癥患者開展治療藥物濃度監(jiān)測(cè)(therapeutic?drug?monitoring，TDM)很有必要，根據(jù)藥物檢測(cè)濃度，為患者提供個(gè)體化給藥方案。目前，人血漿中測(cè)定頭孢他啶/阿維巴坦的方法主要有1.HPLC法；2.HPLC-MS/MS法；3.微生物法；然而，這些方法存在著靈敏度不夠、檢測(cè)時(shí)間過長、樣品處理繁瑣、同位素內(nèi)標(biāo)物難以獲得等限制。

因此，亟待開發(fā)一種準(zhǔn)確度高、靈敏性好、樣品處理簡單、高效的UHPLC-MS/MS法，用以測(cè)定小樣本量的血樣，從而滿足臨床血藥濃度監(jiān)測(cè)的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)血漿中頭孢他啶和阿維巴坦?jié)舛鹊姆椒ǎ摲椒ň哂袦?zhǔn)確度高、靈敏性好、樣品處理簡單以及高效的優(yōu)點(diǎn)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種檢測(cè)血漿中頭孢他啶和阿維巴坦?jié)舛鹊姆椒ǎ摲椒òㄈ缦虏襟E：

S01、在待檢測(cè)的血漿樣本中加入蛋白沉淀劑，經(jīng)渦旋混勻、離心后得到上清液，并用氮?dú)獯抵粮桑?/p>

S02、吹干樣本經(jīng)濃度為5％甲醇溶液復(fù)溶，渦旋混勻后，得到待測(cè)液；

S03、復(fù)溶樣本經(jīng)超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，得到頭孢他啶及阿維巴坦的色譜峰面積。

S04、利用外標(biāo)法，將頭孢他啶和阿維巴坦的色譜峰面積代入已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，即可得到血漿中頭孢他啶和阿維巴坦的濃度。其中以頭孢他啶和阿維巴坦的峰面積為縱坐標(biāo)，頭孢他啶和阿維巴坦的溶液濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，建立得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備步驟為：

(1)在血漿空白樣本中依次加入不同濃度的頭孢他啶及阿維巴坦標(biāo)準(zhǔn)試劑，渦旋混勻后分別得到相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；