[發明專利]一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310110063.1
• 申請日: 2023-02-09
• 公開（公告）號: CN116334090A
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 李磊;謝作益;吳連拼;吳樹杰;楊守醒;吳信雷;張晶晶
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第二醫院（溫州醫科大學附屬育英兒童醫院）
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;A61K47/54
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 解輝

本發明提供了一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體及其制備方法和應用，屬于分子生物學技術領域。本發明所述核酸適配體序列為SEQ?IDNO：1所示的DNA序列，本發明還包括在本發明所述核酸適配體序列上經過修飾，刪減、增加或置換堿基后得到的具有相同特異性識別功能的單鏈DNA分子。本發明所得核酸適配體具備較高特異性及親和力。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，尤其涉及一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體及其制備方法和應用。

背景技術

核酸適配體(aptamer)是一種通過體外篩選技術(SELEX)獲得的具有特殊結構和功能的核酸分子，能與目標物質高特異性、高選擇性地結合。與傳統的識別分子相比，核酸適配體具有親和力高、特異性強、生物兼容性好、容易合成和修改等諸多優點，在生物醫學和食品安全等領域得到了廣泛的關注。特別是核酸適配體作為良好的藥物靶向載體，在科研應用中較為廣泛，但目前并不存在針對心臟表面的核酸適配體。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體，可以特異性結合心肌細胞。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體，所述核酸適配體序列如SEQ?ID?NO：1所示。

優選的，所述核酸適配體的核苷酸序列上的某一位置被磷酸化、氧甲基化、甲基化、氨基化、巰基化、氟化或同位素化。

優選的，所述核酸適配體的核苷酸序列上偶聯有熒光基團、淬滅基團、生物素、納米材料、巰基、氨基或酶。

本發明提供了一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體，由上述核酸適配體進行核苷酸刪減、增加或置換后獲得的具有相同特異性識別功能的單鏈DNA分子。

本發明還提供了上述核酸適配體的篩選方法，以單鏈寡核苷酸片段為篩選材料，以H9C2細胞為正篩對象，以HUVEC細胞為負篩對象篩選得到。

優選的，所述單鏈寡核苷酸片段序列為SEQ?ID?NO：2。

本發明提供了一種與心臟表面特異性結合的核酸適配體衍生物，由上述核酸適配體進行氨基化、巰基化或同位素化修飾得到的與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適配體的衍生物。

本發明還提供了上述核酸適配體或上述的核酸適配體衍生物在心臟靶向研究中的應用。

優選的，利用所述核酸適配體或所述核酸適配體衍生物制備心臟靶向藥物載體。

本發明還提供了上述核酸適配體或上述的核酸適配體衍生物在制備心臟靶向藥物中的應用。

本發明的有益效果：

本發明首次獲得針對心臟表面的核酸適配體。本發明通過cell-SELEX技術，流式細胞術獲取適配體候選，通過流式細胞術，共聚焦熒光顯微鏡等實驗選取核酸適配體，再結合流式細胞術，共聚焦熒光顯微鏡實驗驗證所得核酸適配體具備較高特異性及親和力，保證了所得核酸適配體的實用性。

附圖說明

圖1：PCR產物電泳圖；

圖2：流式細胞術監測篩選進程；

圖3：測序結果示意圖；

圖4：三條序列H1～3(從左到右)分別與H9C2的結合情況；

圖5：核酸適配體H3的二級結構示意圖；

圖6：H3分別在4℃(圖左)和37℃(圖右)Kd值分析；

圖7：H3分別在4℃和37℃的共聚焦顯微鏡觀察實驗結果；

圖8：不同細胞分別與適配體H3的結合情況；