[發明專利]一種篩查和鑒定MYB重排相關基因的引物和探針，以及組合檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202310099863.8
• 申請日: 2023-02-01
• 公開（公告）號: CN116240288A
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 何詠梅;王淑一;袁勢超
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍;徐關壽

本發明涉及使用熒光PCR技術篩查和鑒定MYB重排相關基因的引物探針，組合檢測方法及試劑盒，篩查及鑒定MYB基因重排相關的10種基因，分別為MYB?GATA1、MYB?NFIB、MYB?AHI1、MYB?QKI、MYB?MNX1、MYB?ESR1、MYB?SLC45A2、MYB?ACTG1、MYB?FAM111A、MYB?MCF2。可用于快速檢測MYB重排相關基因表達量的情況，特異性好，靈敏度高，自動化程度高，操作簡單，有較大的線性范圍。可廣泛應用于臨床上了解MYB重排相關的10種基因所涉及的相關疾病的早期診斷和靶向治療，指導個性化治療的方案選擇和預后判斷提供參考依據，對腫瘤的研究有重要的參考意義，同時有針對性地進行微小殘留病灶靶標的監控，預測復發風險。

技術領域

本發明屬于疾病基因檢測中重排基因的檢測領域，涉及特別涉及一種采用多重熒光PCR技術篩查MYB重排相關的10種基因的引物及探針、組合檢測方法和試劑盒。

技術背景

染色體重排常見于血液系統中的惡性腫瘤轉基因表達產生的異常轉錄本和相應的融合蛋白中。絕大多數的惡性血液病和腫瘤的發生和發展過程中都會伴有基因的突變或融合，監控惡性血液病和腫瘤患者的基因突變和融合情況，對疾病的診斷分型、預后判定、治療指導等具有重要的應用價值。

MYB是最早發現的一種原癌基因，具有強效致癌作用。MYB重排涉及的斷裂位點的伴侶基因眾多，因而產生的融合和重排的基因種類也繁多。據研究發現，該基因和疾病其他相關基因可形成的十幾種基因融合，多數融合多發生在血液病及腺狀病中，常見的有，腺樣囊性癌(包括涎腺腺樣囊性癌和乳腺腺樣囊性癌)中的MYB-NFIB融合基因：急性淋巴細胞白血病中的MYB-AHL1融合基因，急性髓系白血病(AML)及急性嗜堿性粒細胞白血病(ABL)中MYB-GATA1融合基因，急性淋巴細胞白血病及淋巴細胞淋巴瘤中的MYB-BDP1，MYB-PLAGL1,SLC12A9-MYB,FAM111A-MYB等融合基因。

在目前基因重排的研究中，用于檢測重排基因的方法主要包括染色體核型分析、熒光原位雜交(FISH)、實時熒光PCR檢測(RQ-PCR)以及二代測序(NGS)。與染色體核型分析和熒光原位雜交技術相比較，實時熒光PCR檢測的靈敏度達到10^-5-10^-6,可以進行更快速、更精準的檢測重排基因，這也是NCCN指南、ELN指南以及專家共識中所推薦的檢測基因重排行之有效的方法。二代測序技術雖然靈敏度也可以達到10^-5-10^-6,但是由于高昂的成本及較長的檢測周期限制了其在重排基因檢測中的應用。多重熒光RT-PCR可以同時擴增多個目的基因，具有節省時間、降低成本、提高效率的優點，尤其是適用于樣本量比較少且檢測靶標比較多的項目。因此多重熒光RT-PCR方法在重排基因篩查方面有更大的應用價值。本發明采用熒光PCR技術來得到一種快速，簡便及準確篩查和鑒定MYB重排相關基因的方式。適用于大批量樣本的臨床結合骨髓檢查、染色體核型分析、免疫分型等結果綜合評估疾病的發生發展；同時有針對性地進行微小殘留病灶靶標的監控，預測復發風險。為了解病情進展和治療效果提供依據，對腫瘤的研究有重要的參考意義。

發明內容

鑒于目前篩查MYB重排相關基因的方法學不能同時滿足經濟高效、結果準確且能用于監測等需求，故本發明設計出一套用于多重熒光PCR技術檢測MYB重排常見基因的引物、探針，并構思出一種靈敏度高，特異性好，檢測通量大，快速且準確的篩查及型別鑒定方案。同時通過調整引物、探針濃度比，優化PCR反應條件及反應體系，使擴增效率達到最佳。旨在輔助臨床診斷患者重排基因的存在情況，對MYB基因重排所引起的相關疾病的診斷，預后判斷、基因層面的靶向治療、診斷標記物和發病機制等研究提供幫助。