[發(fā)明專利]一株產(chǎn)酸性乳糖酶的米曲霉及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310094261.3
• 申請日: 2023-02-10
• 公開（公告）號: CN116179368A
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田健;林新月;諸輝;曹陽;吳呂平
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波希諾亞海洋生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/24;C12R1/69
• 代理公司: 寧波中致力專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33322
• 代理人: 張圓;薛月霞

本發(fā)明提供了一株產(chǎn)乳糖酶的米曲霉(Aspergillus?oryzae)菌株，該菌株于2022年11月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)，保藏地址為廣州，保藏編號為GDMCC?No.63004。本發(fā)明提供的米曲霉易培養(yǎng)，乳糖酶溫度穩(wěn)定性和酸性條件下的pH穩(wěn)定性良好，在60℃，pH為4.5時活性最高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株可產(chǎn)乳糖酶的米曲霉菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

乳糖酶，即β-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-galactoside?galactohydrolase，E.C.3.2.1.23)，具有催化乳糖水解生成半乳糖和葡萄糖并且具有一定的轉(zhuǎn)糖基活性。乳糖酶在食品、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，在食品和醫(yī)藥上主要用來解決乳糖不耐癥。乳糖酶的天然來源十分豐富，廣泛分布在動物、植物和微生物中，但目前研究發(fā)現(xiàn)，僅有微生物產(chǎn)生的乳糖酶在工業(yè)上具有應(yīng)用價值。其中，黑曲霉、米曲霉等霉菌沒有在安全性試驗(yàn)中出現(xiàn)過中毒的現(xiàn)象，被認(rèn)為是安全菌株。霉菌產(chǎn)生的乳糖酶屬于胞外酶，分離提取方便，其最適作用溫度一般在50℃以上，具有較好的熱穩(wěn)定性。

米曲霉是一種好氧真菌，屬于盤菌亞門、曲霉屬，最初分離自日本制造清酒用的酒曲。多年來，在許多國家被用于不同食物如醬油等的發(fā)酵。雖然米曲霉和黃曲霉同屬于曲霉屬黃綠組，但米曲霉不產(chǎn)生黃曲霉毒素，因此被頒予了GRAS認(rèn)證。分子和遺傳鑒定技術(shù)通常無法區(qū)分黃曲霉和米曲霉兩種真菌，最終要依靠形態(tài)和微觀特征鑒別米曲霉。受不同培養(yǎng)基影響，米曲霉可以產(chǎn)生多種次級代謝產(chǎn)物，如萜類、香豆素類、氧化脂質(zhì)和脂肪酸等，其具有不同的生物活性，如抗癌、細(xì)胞毒性、抗菌、抗高血壓和抗病毒活性等。米曲霉還被用作許多工業(yè)酶的生產(chǎn)菌株，如中性和堿性蛋白酶、α-淀粉酶、糖化酶、脯氨酰內(nèi)肽酶、纖維素酶、天冬酰胺酶、脂肪酶、果膠酶、β-半乳糖苷酶等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的是提供一株可產(chǎn)乳糖酶的米曲霉菌株，所述米曲霉菌株（Aspergillus?oryzae）于2022年11月28日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)，保藏地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，保藏編號為GDMCCNo.63004。

所用培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)，25-30℃有氧條件培養(yǎng)。

所述米曲霉的DNA序列為SEQ?ID?NO.1。

所述米曲霉菌是從浙江省寧波市灘涂海水中分離得到的。

本發(fā)明的第二個目的是提供一株米曲霉菌株在表達(dá)乳糖酶中的應(yīng)用。

所述米曲霉表達(dá)的乳糖酶的最適反應(yīng)溫度為60℃，40-65℃活性較高。

所述米曲霉表達(dá)的乳糖酶在4-60℃熱穩(wěn)定性良好。

所述米曲霉表達(dá)的乳糖酶的最適反應(yīng)pH為4.5，pH為4-5時活性較高。

所述米曲霉表達(dá)的乳糖酶在pH為酸性時穩(wěn)定性良好。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明分離和鑒定了一株可產(chǎn)乳糖酶的米曲霉菌株，通過基因組序列分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)合在察氏酵母膏瓊脂培養(yǎng)基(CYA)上的形態(tài)學(xué)特征和鏡檢結(jié)果，確定該菌株為米曲霉。

本發(fā)明提供的米曲霉易培養(yǎng)，乳糖酶溫度和pH穩(wěn)定性好，在溫度為60℃，pH為4.5時活性最高。

附圖說明

圖1為實(shí)施例3中米曲霉菌株在PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d時的菌落形態(tài)(正面)；

圖2為實(shí)施例3中米曲霉菌株在PDA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d時的菌落形態(tài)(反面)；

圖3為實(shí)施例3中米曲霉菌株在顯微鏡下的形態(tài)圖；