[發明專利]一種臍帶間充質干細胞提取凍干粉及制備方法在審
| 申請號： | 202310089618.9 | 申請日： | 2023-02-09 |
| 公開（公告）號： | CN116004530A | 公開（公告）日： | 2023-04-25 |
| 發明（設計）人： | 陳松彬;黃肖;楊銀;李樓英 | 申請（專利權）人： | 廣東省科瑋智麗生物醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775;A01N1/02;A61K35/28;A61K9/19;A61P17/00;A61P17/02 |
| 代理公司： | 廣州瑞之凡知識產權代理事務所(普通合伙) 44514 | 代理人： | 黃愛君 |
| 地址： | 511496 廣東省廣州市番禺*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 臍帶 間充質 干細胞 提取 干粉 制備 方法 | ||
1.一種臍帶間充質干細胞凍干粉的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
1)、將臍帶間充質原代干細胞接種至培養基中，進行傳代培養，待原代干細胞融合至90％時，采用1×PBS清洗細胞，胰蛋白酶消化，完全培養基終止，4℃1000×g離心5min后重懸細胞，按照1:1傳代，即可獲得第1代臍帶間充質原代干細胞；后續逐次傳代，并收集第10代的細胞；
2)將第10代細胞采用1×PBS清洗細胞，胰蛋白酶消化，完全培養基終止，4℃1000×g離心5min后，采用細胞凍存液重懸后加入細胞凍存管，并進行封口處理；
3)將步驟2)中的細胞凍存管經冷凍干燥即可制成凍干粉。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中是在低氧條件下進行傳代培養。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中采用的培養基為DMEM/F12。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中采用的細胞凍存液為含有海藻糖、脫脂乳和葡聚糖的1×PBS溶液。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中采用的細胞凍存液為含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脫脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1×PBS溶液。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中的冷凍干燥是將細胞凍存管先至于4℃下靜置30min后，按10℃/h的速率降溫至-20℃，并于-20℃下放置1h；然后以10℃/h的速率降溫至-80℃，并保持該溫度1h，最后以2℃/h的速率降溫至-196℃，并于該溫度下靜置過夜。
7.一種由權利要求1-6任一項所述方法制備得到的臍帶間充質干細胞凍干粉，其特征在于，所述凍干粉包括臍帶間充質干細胞以及細胞凍存液。
8.如權利要求7所述的臍帶間充質干細胞凍干粉，其特征在于，所述細胞凍存液為含有海藻糖、脫脂乳和葡聚糖的1×PBS溶液。
9.如權利要求8所述的臍帶間充質干細胞凍干粉，其特征在于，所述細胞凍存液為含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脫脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1×PBS溶液。
10.一種權利要求7-9任一項所述的臍帶間充質干細胞凍干粉在制備用于皮膚創面愈合或組織修復和再生試劑或產品中的用途。
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