[發明專利]工程大腸桿菌合成牡荊素和葒草苷的應用在審
| 申請號： | 202310084887.6 | 申請日： | 2023-02-08 |
| 公開（公告）號： | CN115975901A | 公開（公告）日： | 2023-04-18 |
| 發明（設計）人： | 周景文;陳堅;劉世柯;曾偉主 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/61;C12N15/54;C12N15/53;C12P17/16;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 工程 大腸桿菌 合成 牡荊素 葒草苷 應用 | ||
1.一株構建高產尿苷二磷酸葡萄糖的工程菌，其特征在于，所述工程菌以大腸桿菌為宿主，敲除或抑制基因組上糖酵解途徑關鍵基因以及UDPG合成路徑的旁路基因，游離表達磷酸葡萄糖變位酶、UTP-葡萄糖-1-磷酸尿苷酸轉移酶和UDP尿苷激酶；
所述糖酵解途徑關鍵基因包括6-磷酸葡萄糖異構酶編碼基因pgi和/或6-磷酸葡萄糖1-脫氫酶編碼基因zwf；所述UDPG合成路徑的旁路基因包括UDP-葡萄糖6-脫氫酶編碼基因ugd，葡萄糖脫氫酶編碼基因gcd和/或海藻糖-6-磷酸合酶編碼基因otsA。
2.根據權利要求1所述的工程菌，其特征在于，利用質粒pRSFDuet-1、pCDFDuet-1或pACYCDuet-1游離表達磷酸葡萄糖變位酶編碼基因、UTP-葡萄糖-1-磷酸尿苷酸轉移酶編碼基因和/或UDP尿苷激酶編碼基因。
3.一種高產糖基產物的重組菌株，其特征在于，所述重組菌株是在權利要求所述的工程菌的基礎上，游離表達金蓮花來源的8位碳苷糖基轉移酶TcCGT1。
4.根據權利要求3所述的重組菌株，其特征在于，利用質粒pCDFDuet-1表達TcCGT1。
5.一種提高糖基產物產量的方法，其特征在于，所述方法為以大腸桿菌為宿主，敲除或抑制基因組上糖酵解途徑關鍵基因以及UDPG合成路徑的旁路基因，游離表達磷酸葡萄糖變位酶、UTP-葡萄糖-1-磷酸尿苷酸轉移酶、金蓮花來源的8位碳苷糖基轉移酶TcCGT1和UDP尿苷激酶；
所述糖酵解途徑關鍵基因包括6-磷酸葡萄糖異構酶編碼基因pgi和/或6-磷酸葡萄糖1-脫氫酶編碼基因zwf；所述UDPG合成路徑的旁路基因包括UDP-葡萄糖6-脫氫酶編碼基因ugd，葡萄糖脫氫酶編碼基因gcd和/或海藻糖-6-磷酸合酶編碼基因otsA。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，利用質粒pRSFDuet-1、pCDFDuet-1或pACYCDuet-1游離表達了磷酸葡萄糖變位酶編碼基因、UTP-葡萄糖-1-磷酸尿苷酸轉移酶編碼基因、金蓮花來源的8位碳苷糖基轉移酶TcCGT1和/或UDP尿苷激酶編碼基因。
7.權利要求1或2所述的工程菌在制備糖基產物中的應用，其特征在于，所述應用為以黃酮或其他類黃酮為底物，在權利要求1或2所述工程菌的基礎上，過表達金蓮花來源的8位碳苷糖基轉移酶TcCGT1得到重組菌株，再以重組菌株為發酵菌株進行糖基產物的發酵制備。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述黃酮或其他類黃酮包括木犀草素、芹菜素。
9.權利要求3或4所述的重組菌株在制備糖基產物中的應用，其特征在于，所述應用為以黃酮或其他類黃酮為底物，以權利要求所述的重組菌株為發酵菌株進行糖基產物的發酵制備。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述黃酮或其他類黃酮包括木犀草素、芹菜素。
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