[發明專利]一種定向減毒的痘苗病毒疫苗

在審

• 申請號: 202310080294.2
• 申請日: 2023-01-18
• 公開（公告）號: CN115927215A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 郭斐;許豐雯;黃羽;范張玲;梅珊
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院病原生物學研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N7/04;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/39;C12N15/85;A61K39/285;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張擁;張廣育

本發明涉及一種重組痘苗病毒及其用途，該重組痘苗病毒相對于痘苗病毒天壇株，缺失了TK基因、F4L基因和B2R基因中的至少一種。本發明的重組痘苗病毒具有低毒性、能完整復制且具有更高免疫原性的特點。因此，本發明提供的重組痘苗病毒有更高的安全性和增強的免疫原性。本發明提供的重組痘苗病毒作為疫苗具有更高的應用價值，可用于預防痘病毒科病毒的感染，以及作為病毒載體用于構建其他感染性疾病疫苗和腫瘤疫苗等。

技術領域

本發明屬于疫苗領域，尤其涉及一種重組痘苗病毒及其用途。

背景技術

痘病毒(Poxvirus)是病毒粒最大的一類DNA病毒，包括多種類型：痘苗病毒(Vaccinia?virus)、天花病毒(Variola?virus)、牛痘病毒(Cowpox?virus)和猴痘病毒(Monkey?poxvirus)等。上世紀以前，天花病毒曾在全球范圍內傳播，致死率達30％，而后痘苗病毒被用作疫苗株，用于天花的預防免疫，在消滅天花的過程中發揮重大作用，而后研究發現，用于預防天花的痘苗病毒株接種后，對猴痘等其他正痘病毒感染亦具有保護作用。1978年，WHO宣布天花病毒被消滅，痘苗病毒的接種也隨之停止，但因痘苗病毒具有宿主范圍廣、非必需基因多、高度保守性、外源基因的容量大、胞質復制等特點，其作為疫苗載體，對于研發新型的感染型疾病疫苗載體及溶瘤病毒，仍具有進一步研究價值。

用于預防天花的痘苗病毒，即初代痘苗病毒(vaccinia?virus，VACV)，在哺乳動物細胞中具有完整的復制能力。初代疫苗株的生產多在動物體內進行，將疫苗毒株接種在動物皮膚淋巴結內復制擴增后，制成疫苗株用于人的免疫接種，如在美國儲存生產的NewYork?City?Board?of?Health(NYCBH)株，歐洲多國儲存使用的Lister毒株，中國的天壇株(VACV?Tiantan，VTT)，丹麥的Copenhagen(Cop)株等。初代疫苗株，雖保護率高，但是在人群中具有一定的副作用，40-47％的注射部位疼痛，5-9％出現發熱，且有個別免疫力異常者接種者后出現濕疹、腦炎等癥狀。

隨著疫苗生產技術的發展，疫苗毒株的生產轉向組織或雞胚細胞培養，由此產生第二代痘苗病毒株。如，lisiter毒株在兔腎細胞中培養產生的RIVM毒株及在雞胚尿囊膜中培養而成的Lister/CEP毒株，NYCBH株在MRC-5細胞中傳代而形成的CCSV毒株及ACAM1000、ACAM2000毒株等。第二代免疫株與初代疫苗株具有相似的免疫效果，且ACAM2000疫苗株相較于初代疫苗株，神經毒性相對降低，但作為疫苗株免疫人體后仍會產生一定的副作用。

為解決前兩代疫苗株的相對安全性問題，進一步開發出減毒的第三代疫苗株。由具有復制能力的一、二代疫苗株在培養細胞內持續傳代，基因突變在代間積累，宿主范圍因子、病毒毒力基因等發生改變，進而篩選出低毒性的疫苗毒株。第三代疫苗株主要包括MVA株、LC16m8株及DI株。日本研究者利用Lister毒株，低溫條件下在兔腎上皮細胞(PRK)中傳代，得到減毒株LC16m8，基因突變位點相對較少，仍能在人細胞內復制。日本初代Dairen疫苗毒株在1日齡雞胚中傳代后，得到減毒株DI，基因缺失位點多于LC16m8株，有19個開放閱讀框缺失，在大多數哺乳動物細胞內不能復制。毒性最弱的第三代疫苗株為MVA株，該疫苗株由COP株在雞胚成纖維細胞中傳代500多次后分離得出，相較于母代CVA株，其基因組缺失約15％，雖能感染人細胞，并編碼早期、中期和晚期蛋白，但不能組裝成有感染性的病毒顆粒，故而不能在包括人在內的多種哺乳動物細胞內復制，毒性顯著降低，且病毒傳代效果要好于DI株，作為新一代疫苗載體，被廣泛用于防治感染性疾病和腫瘤。但是對比不同疫苗株的免疫效果發現，同等劑量下，復制缺陷型毒株需要比初代疫苗株高1-2個對數級別的病毒滴度或者采用加強免疫的方案，才能達到初代疫苗的免疫效果，且抗體保護時間、中和效果、特異性細胞免疫等仍不及復制完整的初代疫苗效果。

因此，開發一款具有完整復制能力、毒性減低、免疫原性增強的新一代候選痘苗病毒，用于預防痘病毒科病毒導致的動物源性感染及人際間感染的傳播，以及作為新型的疫苗載體，很有必要。

發明內容