[發明專利]一種抗甲苯噻嗪單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202310075896.9
• 申請日: 2023-02-07
• 公開（公告）號: CN116003616A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 魏文濤;上官科科;成含鋒
• 申請（專利權）人: 杭州旭科生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/94
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

本發明利用甲苯噻嗪?BSA偶聯物免疫小鼠，再根據雜交瘤技術獲得高純度、高靈敏度和高特異性的抗甲苯噻嗪的單克隆抗體，可用于開發檢測甲苯噻嗪的免疫測試產品。所述抗甲苯噻嗪的單克隆抗體能以最快的速度為相關檢驗檢疫部門提供可靠實驗室診斷，適用于戒毒所、醫院、高危人群普查，特種行業和招工體檢工作中篩查以及衛生防疫部門對甲苯噻嗪藥物的濫用監管以及食品檢查。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，涉及一種抗甲苯噻嗪單克隆抗體及其應用。

背景技術

甲苯噻嗪(xylazine,C12H16N2S)又名甲芐噻嗪、賽拉嗪，是一種廣泛使用的獸用鎮靜止痛劑，有麻醉作用，該化合物通過作用于α2受體和外周神經，起到局部麻醉和肌肉松弛作用。甲苯噻嗪是α2-腎上腺素受體激動劑，全身應用后能產生一定的麻醉作用，麻醉誘導時間短，有良好的鎮靜和肌松作用，但僅有微弱的鎮痛作用，且對呼吸及心臟傳導系統有抑制作用，并刺激唾液腺及氣管腺體的分泌增加。腹腔注射甲苯噻嗪后可以透過血腦屏障進入大腦，通過激活下丘腦的肽能神經元，使垂體中的腦啡肽和內啡肽的分泌和合成增加，兩者進入血液循環調節血管和呼吸系統功能，引起血壓下降、呼吸抑制等。

甲苯噻嗪對人的麻醉作用迅速，肌肉注射15-20min、靜脈注射1-2min產生作用，藥效可持續4小時以上。甲苯噻嗪在體內吸收、代謝、分解快，僅有約8％的原體從尿液排出，口服10-15小時后幾乎排泄完全。其在血液中原型物較少，且難以提取凈化，易被漏檢。因此建立血液中甲苯噻嗪的快速、簡便準確的檢驗方法對相關案件的檢驗至關重要。

目前，常用的甲苯噻嗪的初篩方法有放射免疫分析法、酶聯免疫分析法、免疫層析技術等。確認方法主要用高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC/MS)等理化檢測方法。上述方法均需要精密儀器和特定的試驗條件，在實際應用中存在了較大的局限。為了解決現場大規模應用的問題，免疫學法由于其檢測速度快，成本低，通量高，部分免疫學檢測方法(膠體金紙層析法)還具有操作簡單，不需要額外設備等優點，倍受重視。因此，開發出優良的甲苯噻嗪診斷用抗原抗體成為了決定免疫學法應用前景的關鍵。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供一種甲苯噻嗪抗體，可有效提高檢測甲苯噻嗪的酶標產品和金標產品的檢出率，降低假陽率。它能以最快的速度為相關檢驗檢疫部門提供可靠實驗室診斷，適用于戒毒所、醫院、高危人群普查，特種行業和招工體檢工作中篩查以及衛生防疫部門對甲苯噻嗪藥物的濫用監管以及食品檢查。

本發明提供一種抗甲苯噻嗪單克隆抗體，所述抗甲苯噻嗪單克隆抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列為SEQ?ID?NO:3～5；所述輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列為SEQ?ID?NO:11～13。

進一步地，所述重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2，所述輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:10。

本發明還提供一種抗甲苯噻嗪單克隆抗體，所述抗甲苯噻嗪單克隆抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，其特征在于，編碼所述重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3的核苷酸序列為SEQ?ID?NO:6～8；所述輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3核苷酸序列為SEQ?ID?NO:14～16。

進一步地，編碼所述重鏈可變區的核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1，所述輕鏈可變區的核苷酸序列為SEQ?ID?NO:9。

進一步地，所述抗甲苯噻嗪單克隆抗體為完整的抗體或者經處理后具有甲苯噻嗪結合活性的片段。

本發明還提供一種檢測樣本中甲苯噻嗪的試劑盒，所述試劑盒包括所述抗甲苯噻嗪單克隆抗體。

進一步地，所述樣本為尿液。

本發明所述的抗甲苯噻嗪單克隆抗體在甲苯噻嗪免疫檢測中的應用。