[發(fā)明專利]貓杯狀病毒培養(yǎng)方法及病毒液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310065544.5
• 申請日: 2023-02-06
• 公開（公告）號: CN115806942B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 朱旭;郝鵬;張燕紅;王艷杰;張海寶;韓冬;李曉燕;孟書麗;趙嘉楠;趙飛飛
• 申請（專利權）人: 金宇保靈生物藥品有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N5/071
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司 11002
• 代理人: 李正

本發(fā)明涉及獸用生物制品技術領域，尤其涉及一種貓杯狀病毒培養(yǎng)方法及病毒液。所述貓杯狀病毒培養(yǎng)方法使用微載體培養(yǎng)宿主細胞，接毒，繼續(xù)培養(yǎng)，得到病毒液；所述宿主細胞懸液的細胞密度為1.8×10⁶cells/mL?2.2×10⁶cells/mL；所述微載體在所述宿主細胞懸液中的加入量為2.5?3.5g/L；所述微載體以交聯(lián)葡聚糖為基質，密度為1.01?1.05g/ml，顆粒大小為185?195μm，表面積≥4200cm²。本發(fā)明所述方法制備得到的貓杯狀病毒液滴度≥10^10.5TCID₅₀。

技術領域

本發(fā)明涉及獸用生物制品技術領域，尤其涉及一種貓杯狀病毒培養(yǎng)方法及病毒液。

背景技術

貓杯狀病毒（ Feline?calicivirus,?FCV）是一種導致貓傳染性鼻結膜炎的病毒，會導致貓的輕度至重度呼吸道感染和口腔疾病。貓感染FCV后，會出現(xiàn)精神沉郁，打噴嚏，口、鼻、眼分泌物增多和角膜炎等癥狀。FCV具有高度傳染性，發(fā)生率較高。由FCV引起的幼貓死亡率高達30%。目前認為，F(xiàn)CV呈世界性分布，并可能感染所有貓科動物，我國貓群中亦存在FCV抗體。

針對FCV病毒，免疫疫苗是最好的選擇。國外預防FCV主要使用滅活疫苗和弱毒疫苗。在疫苗制備過程中，抗原培養(yǎng)是最重要的一環(huán)。找到一種安全、有效、產(chǎn)量高的培養(yǎng)FCV的方法，對FCV疫苗的研發(fā)和制備具有關鍵作用。如何實現(xiàn)貓杯狀病毒的大規(guī)模擴增，有效降低生產(chǎn)成本，進一步提高產(chǎn)品質量是目前本領域的研究難點。

發(fā)明內容

有鑒于背景技術中存在的問題，本發(fā)明首先提供了一種貓杯狀病毒培養(yǎng)方法，使用微載體培養(yǎng)宿主細胞，接毒，繼續(xù)培養(yǎng)，得到病毒液。

在本發(fā)明中，所述宿主細胞包括F81細胞和/或CRFK細胞，優(yōu)選包括F81細胞。

本發(fā)明中，使用微載體培養(yǎng)宿主細胞的方法包括：在宿主細胞懸液中加入微載體；所述宿主細胞懸液的細胞密度為1.8×10⁶cells/mL-2.2×10⁶cells/mL；優(yōu)選為2×10⁶cells/mL；所述微載體在所述宿主細胞懸液中的加入量為2.5-3.5g/L，優(yōu)選為3g/L；所述微載體以交聯(lián)葡聚糖為基質，密度為1.01-1.05g/ml；顆粒大小為185-195μm；表面積≥4200cm²；優(yōu)選地，所述微載體型號選擇Cytodex-1型，Cytodex-1型微載體是以交聯(lián)葡聚糖為基質，表面帶正電荷；微載體密度為1.03g/mL；顆粒大小190μm；表面積4400cm²。

本發(fā)明研究了不同規(guī)格微載體的培養(yǎng)效果，發(fā)現(xiàn)以交聯(lián)葡聚糖為基質，密度為1.01-1.05g/ml；顆粒大小為185-195μm；表面積≥4200cm²的微載體更適于貓杯狀病毒的培養(yǎng)。在本發(fā)明所述宿主細胞密度和微載體添加濃度條件下，利用所述微載體培養(yǎng)宿主細胞的效果良好，得到的貓杯狀病毒滴度更高，可達到10.5?LogTCID₅₀/mL。其他規(guī)格的微載體和貓杯狀病毒培養(yǎng)的適配度相對較差，宿主細胞脫落現(xiàn)象嚴重，且宿主細胞培養(yǎng)活性不高，培養(yǎng)后細胞密度低，得到的貓杯狀病毒滴度顯著降低。

在本發(fā)明更具體的優(yōu)選實施方式中，所述微載體型號選擇Cytodex-1型。和其他型號的微載體相比，Cytodex-1型微載體的相對表面積更大，每毫升培養(yǎng)液可得到數(shù)百萬細胞。較貼壁培養(yǎng)可以更快速的放大產(chǎn)量。且微載體培養(yǎng)細胞在培養(yǎng)液上可以延續(xù)貼壁培養(yǎng)階段的基礎培養(yǎng)基，相較于全懸浮培養(yǎng)，省去了篩選優(yōu)化培養(yǎng)基的工序，使成本更少，且有助于加快研發(fā)速度。