[發(fā)明專(zhuān)利]一種可視化檢測(cè)幽門(mén)螺旋桿菌的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310062274.2
• 申請(qǐng)日: 2023-01-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116121424A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔惠芳;牛常斌;宋小杰;呂琪妍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新

1.三叉頸環(huán)結(jié)構(gòu)DNA組裝體或Y型鼓包結(jié)構(gòu)DNA組裝體，其特征在于，其由3條單鏈DNA組裝而成，其中序列a為具有如下DNA序列的G-四鏈體：GGGTAGGGCGGGTTGGG；另外兩條單鏈DNA分別含有一段與序列a互補(bǔ)的DNA序列，序列b長(zhǎng)度為15-30個(gè)堿基并具有如下DNA序列：5’-CCCAACCCX……X-3’,X代表任意堿基，序列c長(zhǎng)度為13-23個(gè)堿基并具有如下DNA序列：5’-X……XGCCCTACCC-3’，X代表任意堿基；序列b的一段序列與序列c的一段序列互補(bǔ)，且序列b為含環(huán)DNA序列，其中有一段序列不與其他兩條序列中的任何一段互補(bǔ)。

2.如權(quán)利要求1所述的三叉頸環(huán)結(jié)構(gòu)DNA組裝體或Y型鼓包結(jié)構(gòu)DNA組裝體，其特征在于，其由3條單鏈DNA組裝而成，3條單鏈DNA分別具有序列表中SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4的脫氧核糖核酸序列。

3.一種可視化檢測(cè)病原體的方法，其特征在于，以權(quán)利要求1或2所述的三叉頸環(huán)結(jié)構(gòu)DNA組裝體或Y型鼓包結(jié)構(gòu)DNA組裝體作為產(chǎn)生信號(hào)的報(bào)告探針，以過(guò)氧化物酶底物作為指示劑，檢測(cè)病原體。

4.如權(quán)利要求3所述的可視化檢測(cè)病原體的方法，其特征在于，所述過(guò)氧化物酶底物選自2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)、3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、3－氨基－9－乙基咔唑、4-氨基安替比林或魯米諾。

5.如權(quán)利要求3所述的可視化檢測(cè)病原體的方法，其特征在于，通過(guò)如下方法實(shí)現(xiàn)：將三叉頸環(huán)結(jié)構(gòu)DNA組裝體或Y型鼓包結(jié)構(gòu)DNA組裝體、病原體樣品的RPA產(chǎn)物、Cas12a蛋白、crRNA、ddH₂O、K⁺緩沖液、NeBuffer2.1緩沖液加入Eppendorf管或96孔板微孔中，混合混勻，反應(yīng)；加入血紅素溶液孵育，最后加入H₂O₂溶液和指示劑反應(yīng)，結(jié)束后加入終止液，測(cè)量吸光度，或用裸眼觀察溶液顏色深淺。

6.如權(quán)利要求3、4或5所述的可視化檢測(cè)病原體的方法，其特征在于，病原體選自幽門(mén)螺旋桿菌。