[發明專利]一株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)SPL018及獲取方法與應用

在審

• 申請號: 202310059804.8
• 申請日: 2023-01-17
• 公開（公告）號: CN116121142A
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 夏寶成;徐穎怡;趙國偉;常勇;袁瑞娜
• 申請（專利權）人: 西安上甫科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01C1/06;A01G7/06;C12N1/02;C12P3/00;C12P9/00;C12R1/01
• 代理公司: 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738
• 代理人: 吳順麗

1.一株分離的乳酸乳球菌(Lactococcus?lactis)SPL018，該菌種2022年09月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC?NO.25808，分類命名為乳酸乳球菌Lactococcus?lactis?SPL018。

2.根據權利要求1所述的乳酸乳球菌(Lactococcus?lactis)SPL018的獲取方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、采集安康市寧強富硒土壤種植的黃瓜、茶葉等作物的根土，抖落收集根部土壤于無菌袋中作為分離樣源；

B、制備富硒土壤浸液培養基：取富硒土壤10g，加入0.2％鹽酸100mL，40℃恒溫混合攪拌30min后，用中速濾紙過濾收集濾出液，與900mL純水混合，然加入蔗糖1.5％,酪蛋白1.2％,MgSO₄·7H₂O?0.06％,K₂HPO₄?0.35％,CaCO₃0.4％,pH6.0。培養基用500mL三角瓶分裝100mL，121℃滅菌32min備用；

C、待培養基滅菌后溫度降低到30-40℃左右時，在超凈臺下按照5％的質量比加入富硒土，三角瓶置于35℃、200rpm的恒溫搖床中進行富集培養48h；

D、之后取富集培養液5％重復接種培養5次代后，取樣在固體富硒土壤浸液培養基平板上反復劃線分離出單菌株，挑起粉紅色或紅色的菌株接種入上述富硒土壤浸液培養基內馴化，再將上述操作重復多次，劃線接入MRS培養基培養,挑選乳白色之后純化得到乳酸乳球菌(Lactococcus?lactis)菌株，命名為SPL018。

3.權利要求1所述的乳酸乳球菌SPL018在硒氧化中的應用，特征在于將乳酸乳球菌SPL018活化后按照體積比1-10％接種于含二價無機硒鹽的MRS培養基中，然后通入包含氮氣：二氧化碳：氧氣的體積比例為8：1：1的混合氣體，通氣量10NL/min，進行發酵轉化。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，當無機硒含量低于20mg/L時，所述乳酸乳球菌可將硒轉化為有機硒；當無機硒含量在100～8000mg/L時，所述乳酸乳球菌可將硒轉化為單質硒，單質硒尺寸為100～200nm。

5.如權利要求1所述乳酸乳球菌SPL018的應用，包括含有有乳酸乳球菌SPL018及載體有效成分的制劑，在稀釋100-1000倍后進而通過土壤施用、葉面噴施及拌種等方式應用。