[發(fā)明專利]PPARγ敲除細(xì)胞系的構(gòu)建及作為PRRSV生產(chǎn)細(xì)胞系的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310059618.4
• 申請日: 2023-01-19
• 公開（公告）號: CN116286816A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖書奇;鄭紫方;鄭海學(xué);李洋;馬志倩;李志偉;馮英桐;劉霄
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/12;A61K38/46;A61P31/14
• 代理公司: 北京力量專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 毛婷

1.PPARγ為靶點(diǎn)在篩選預(yù)防或治療豬繁殖與呼吸綜合征藥物中的應(yīng)用，所述藥物促進(jìn)PPARγ表達(dá)。

2.PPARγ或表達(dá)PPARγ的重組載體/質(zhì)粒在制備預(yù)防或治療豬繁殖與呼吸綜合征藥物中的應(yīng)用。

3.PPARγ基因敲除/缺失細(xì)胞系作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒或病毒疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系的應(yīng)用。

4.抑制/沉默/干擾PPARγ基因表達(dá)的試劑在制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒或病毒疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系中的應(yīng)用。

5.一種特異性靶向PPARγ基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如下：

正義鏈：CACCGGGCTGCCAGTTTCGCTCCG；

反義鏈：AAACCGGAGCGAAACTGGCAGCCC。

6.如權(quán)利要求5所述的sgRNA在敲除/缺失PPARγ基因或在制備PPARγ基因敲除/缺失細(xì)胞系中的應(yīng)用。

7.一種用于敲除PPARγ基因的試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑或試劑盒包括權(quán)利要求5所述的sgRNA，或靶向敲除PPARγ基因的打靶載體；所述靶向敲除PPARγ基因的打靶載體包括權(quán)利要求5所述的sgRNA和Cas9蛋白基因的編碼序列。

8.一種PPARγ基因敲除/缺失細(xì)胞系，其特征在于，所述PPARγ基因敲除/缺失細(xì)胞系的構(gòu)建方法為：利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)，使用權(quán)利要求5所述的sgRNA敲除宿主細(xì)胞中的PPARγ基因獲得。

9.一種PPARγ基因敲除/缺失的MARC-145細(xì)胞系，所述MARC-145細(xì)胞系的構(gòu)建方法包括以下步驟：

(1)制備權(quán)利要求5所述的特異性靶向PPARγ基因的sgRNA；

(2)將步驟(1)制備的sgRNA退火并連接至慢病毒敲除質(zhì)粒，得到同時表達(dá)Cas9蛋白基因和打靶sgRNA序列的慢病毒敲除質(zhì)粒；

(3)將步驟(2)制備的慢病毒敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MARC-145細(xì)胞，用嘌呤霉素抗生素篩選和細(xì)胞有限稀釋法獲得PPARγ基因敲除/缺失的MARC-145細(xì)胞系。

10.如權(quán)利要求8或9所述的細(xì)胞系作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒或病毒疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系的應(yīng)用。