[發明專利]一種同型半胱氨酸檢測試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310056091.X
• 申請日: 2023-01-17
• 公開（公告）號: CN116200457A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 何愛民;宋雪薇;于利平
• 申請（專利權）人: 光景生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/527
• 分類號: C12Q1/527;C12Q1/48
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 王艷齋

本發明提供了一種同型半胱氨酸檢測試紙條及其制備方法和應用，所述試紙條包括卡殼下板和卡殼上板，以及夾在卡殼下板和卡殼上板之間依次層疊的反應層、輔助濾血層、濾血層及擴散層；所述反應層包括反應膜和固定于所述反應膜上的反應層試劑，所述反應層試劑包括胱硫醚β合成酶?PLP共固定化酶和胱硫醚β裂解酶?PLP共固定化酶。所述試紙條無需配合大型儀器使用，采集末梢全血加樣即可測試，并且試紙條的保存條件為2?30℃，不需限制冷藏保存，應用場景更加多樣，具有簡便、快速、靈活以及無需專業人員操作等優點。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種同型半胱氨酸檢測試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

同型半胱氨酸(HCY)是一種含巰基的氨基酸，主要來源于飲食攝取的蛋氨酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中一個重要的中間產物，其本身并不參加蛋白質的合成。在體內，約1/2的Hcy和甲基四氫葉酸在蛋氨酸合成酶(Methionine?Synthase?reductase，MS)的作用下，生成蛋氨酸和四氫葉酸，四氫葉酸在N5,N10-亞甲基四氫葉酸還原酶(Methylenetetralydrofolate，MTHFR)的作用下生成甲基四氫葉酸；其余約1/2的Hcy通過轉硫基途徑，即Hcy與絲氨酸在胱硫醚β合成酶(Cystathionineβ-synthase，CBS)作用下形成胱硫醚，一部分在胱硫醚裂解酶的作用下形成半胱氨酸，最后生成丙酮酸、硫酸和水，此過程需維生素B6為輔酶及絲氨酸羥甲基轉移酶，另一部分則生成同型絲氨酸。任何原因引起前兩條代謝途徑障礙時，升高的Hcy在氨基酰-tRNA合成酶的作用下，生成同型半胱氨酸硫內酯(homocysteine?thiolactone，HTL)，HTL是Hcy在氨基酰-tRNA合成酶編輯或校正過程中形成的反應產物，屬于一種環硫酯。Hcy可以直接或間接導致血管內皮細胞損傷，促進血管平滑肌細胞增殖，影響低密度脂蛋白的氧化，增強血小板功能，促進血栓形成。

目前，同型半胱氨酸檢測多采用全自動生化分析儀配合試劑盒進行測試，需要專業人員操作，采集被檢測人員的靜脈全血，經離心操作得到血清樣本。用血清樣本才可以進行測試。此種檢測方法主要由專業人員操作，門檻高，并且需要大型儀器的配合，耗時長。

市面上常見的同型半胱氨酸檢測試劑盒多為配合全自動生化分析儀使用的生化試劑盒，僅有少數幾家采用酶循環法原理，在干式生化平臺實現同型半胱氨酸的檢測單項測試試劑盒，但是試劑盒的保存條件多為2-8℃，有效期為12個月，由于保存條件多為2-8℃，因此在運輸和保存中存在一定的限制。目前并未有出現同型半胱氨酸檢測試劑盒(干化學法)可在2-30℃條件下保存12個月。因此，提供一種可2-30℃長期保存的同型半胱氨酸檢測試紙條，對同型半胱氨酸的檢測具有重要的應用價值。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種同型半胱氨酸檢測試紙條及其制備方法和應用。本發明首先使用與輔酶固定化的酶原料，再通過干化學平臺技術手段將共固定化的酶固定在膜上，通過對各層膜的整合重組實現試劑盒可以在2-30℃穩定保存12個月。本發明所述試紙條無需配合大型儀器使用，采集末梢全血加樣即可測試，并且試紙條的保存條件為2-30℃，不需限制冷藏保存，應用場景更加多樣，具有簡便、快速、靈活以及無需專業人員操作等優點。

為達到此發明目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種同型半胱氨酸檢測試紙條，所述試紙條包括卡殼下板和卡殼上板，以及夾在卡殼下板和卡殼上板之間依次層疊的反應層、輔助濾血層、濾血層及擴散層；

所述反應層中固定有胱硫醚β合成酶-PLP共固定化酶和胱硫醚β裂解酶-PLP共固定化酶。