[發明專利]改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用

在審

• 申請號: 202310048380.5
• 申請日: 2023-01-18
• 公開（公告）號: CN116115642A
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 王本旭
• 申請（專利權）人: 北京美歐賽奧金生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K35/16;A61K35/18;C12N5/078;A61K35/32;A61P19/02;A61P19/08
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1.改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于，包括以下配重分量，所述制劑組合物包括兩個制劑組：制劑組一包含PRP、氯化鈣、間充質干細胞外泌體、間充質干細胞分化軟骨細胞外泌體；制劑組二包含按一定比例加入間充質干細胞和軟骨細胞。

2.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述組合物包括富血小板血漿，所述富血小板血漿為患者自體血漿，其分離方法為差速離心，具體步驟：

(1)取患者抗凝血10ml，500g，離心10min。血液分為三層。全部取出上層和中間層至新鮮15ml離心管中。

(2)200g，離心10min，上層黃色血漿轉移至新鮮15ml離心管中。去除白細胞。

(3)800g，離心10min，去除3ml刻度以上部分，剩余血漿重懸沉淀。即為富小板血漿。

3.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述間充質干細胞可來源于臍血、骨髓、胎盤、脂肪等組織。間充質干細胞為第四代或第五代的細胞。優選臍血間充質干細胞。

4.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述間充質干細胞外泌體優選來源于臍血間充質干細胞。其制備具體操作步驟：

步驟一、按8000/cm2接種P4或P5代臍血間充質干細胞于T175培養瓶中，培養液中同時加入1％PRP。孵箱中培養。

步驟二、第3天收集上清，300g，離心10min。上清轉移至新離心管中。去除殘留細胞。

步驟三、2000g，4℃，離心10min，上清轉移至新離心管中。去除細胞碎片。

步驟四、10000g，4℃，離心30min，上清轉移至新離心管中。去除細胞碎片和大囊泡。

步驟五、100000g，4℃，離心70min，去上清，PBS重懸沉淀。

步驟六、100000g，4℃，離心70min，去上清。獲得外泌體。

5.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述軟骨細胞由權利要求2的間充質干細胞誘導分化所得。分化培養中加入1％PRP。

6.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述軟骨細胞外泌體優選來源于臍血間充質干細胞分化軟骨細胞。其制備具體操作步驟同權利要求4。

7.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述氯化鈣濃度為20～40mg/ml。

8.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述間充質干細胞與軟骨細胞比例為7～9∶3～1，優選9∶1.

9.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述間充質干細胞濃度為(3.5～4.5)x107/m。

10.根據權利要求1所述的改良富血小板血漿制備及制劑組合物應用，其特征在于：所述軟骨細胞濃度為(0.5～1.5)x107/ml，所述制劑組合物在治療膝關節炎和股骨頭壞死的藥物中的應用。