[發明專利]一種合成姜黃素葡萄糖苷的基因工程菌構建及其應用

在審

• 申請號: 202310047390.7
• 申請日: 2023-01-31
• 公開（公告）號: CN115975900A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 李志;肖運柱
• 申請（專利權）人: 深圳中科欣揚生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/54;C12N15/61;C12P19/44;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌過表達了大腸桿菌來源的葡萄糖-6-磷酸變位酶Pgm和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶GalU，同時過表達了Catharanthus?roseus來源的UDP-葡萄糖基轉移酶CaUGT2。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述葡萄糖-6-磷酸變位酶Pgm的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示；所述UDP-葡萄糖焦磷酸化酶GalU的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示；所述UDP-葡萄糖基轉移酶CaUGT2的氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

3.根據權利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，編碼所述葡萄糖-6-磷酸變位酶Pgm的核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示；編碼所述UDP-葡萄糖焦磷酸化酶GalU的核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示；編碼所述UDP-葡萄糖基轉移酶CaUGT2的核苷酸序列如SEQ?ID?No.6所示。

4.根據權利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以pGEX、pZSH、pBAD或pET為表達載體。

5.根據權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是采用pACYCDuet質粒表達葡萄糖-6-磷酸變位酶和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶；同時，采用pGEX質粒表達UDP-葡萄糖基轉移酶。

6.根據權利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以大腸桿菌、枯草芽孢桿菌或畢赤酵母為表達宿主。

7.一種全細胞轉化制備姜黃素葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述方法為，將權利要求1～6任一所述的基因工程菌添加至含有底物姜黃素、葡萄糖的反應體系中，進行反應，制備得到姜黃素葡萄糖苷。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，反應體系中，所述重組大腸桿菌的添加OD₆₀₀達到0.6-1.0；所述底物姜黃素的濃度為：0.1-2.5g/L；葡萄糖的濃度為0g/L-10g/L。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法為，在37℃，200rpm條件下，搖床培養至其OD600達到0.6，而后加入1M?IPTG至終濃度為1mM，同時加入姜黃素底物使其終濃度為0.5g/L，并加入葡萄糖使其終濃度為2.0g/L，培養條件改為30℃，200rpm，避光培養72h，完成姜黃素的生物轉化。

10.權利要求1～6任一所述的重組大腸桿菌在制備姜黃素葡萄糖苷或含有姜黃素葡萄糖苷的產品中的應用。