[發明專利]HRM技術檢測大環內酯類耐藥基因23S rRNAc.2183T/C的引物和方法

在審

• 申請號: 202310044425.1
• 申請日: 2023-01-30
• 公開（公告）號: CN115992275A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 王淑一;于曉鐘;何詠梅
• 申請（專利權）人: 合肥艾迪康醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

本發明涉及大環內酯類藥物治療幽門螺桿菌(H.pylori)感染是否會產生耐藥的基因23S?rRNA相關位點c.2183T/C檢測的引物和方法，包括利用HRM技術檢測23S?rRNA?c.2183T/C位點的擴增引物和檢測方法。本發明操作簡便、檢測速度快、通量高、費用低、靈敏度和特異度高、重復性好且結果便于判讀。有助于臨床上幽門螺桿菌(H.pylori)感染相關疾病的合理有效的早期治療，對于及時干預治療避免病情進展、調整治療方案、預測預后、預防臨床復發都具有重要意義。

技術領域

本專利涉及一種臨床用藥檢驗用途的基因檢測方法，采用HRM技術，用于檢測幽門螺桿菌(HP)感染患者體內的HP?23S?rRNA?c.2183T/C突變情況，從而確定患者體內的HP是否適合大環內酯類藥的治療。該方法可有效的節約檢測時間和檢測成本，提高治療的有效性和準確性。

技術背景

幽門螺旋桿菌感染是我國感染率較高的一種慢性疾病，且近年來其感染率仍在不斷升高。我國平均感染率已經達到56％，即有將近8億人口存在幽門螺旋桿菌感染。幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，簡稱Hp)。是革蘭氏陰性、微需氧的細菌，生存于胃部及十二指腸的各區域內。可以通過口-口、糞-口途徑進行傳播，且與慢性胃炎、消化性潰瘍和胃腺癌等胃腸道疾病的發展有關，還參與其他胃外疾病的發展。它會引起胃黏膜輕微的慢性發炎，甚或導致胃及十二指腸潰瘍與胃癌。是導致胃癌及其癌前病變的重要始動因子，被世界衛生組織下屬機構(IARC)列為胃癌的第一類致癌原。

大環內酯類抗生素(macrolides?antibiotics，MA)是一類分子結構中具有12-16碳內酯環的抗菌藥物的總稱，通過阻斷50s核糖體中肽酰轉移酶的活性來抑制細菌蛋白質合成，屬于快速抑菌劑。大環內酯類藥物具有革蘭陽性球菌、幽門螺旋桿菌和非典型肺炎衣原體、支原體、軍團菌等廣譜抗菌活性，且毒副作用小、價格低廉和無過敏反應，另外尚有抗菌以外的免疫調節、抗腫瘤、抗蟲和抑制炎癥因子產生…等諸多作用。因而臨床一直將其作為一線用藥和聯合治療藥物之一，在臨床中的感染性疾病，呼吸系統疾病，心腦血管疾病，消化系統疾病的臨床治療中，都有廣泛的應用。在消化系統疾病中，大環內酯類藥物用于治療消化性潰瘍的研究已屢有報道，這種治療作用與該類藥物對幽門螺旋桿菌的抗菌活性有關。大環內酯類藥物與制酸劑等藥物聯用能根除胃潰瘍患者胃中的幽門螺旋桿菌，現在已成為許多學者推薦和臨床上常用的治療幽門螺旋桿菌方法。

幽門螺旋桿菌感染者其最佳的治療時機均是在患者發生萎縮性胃炎和腸化生之前,因為一旦患者發生萎縮性胃炎和腸化生，即便對其進行幽門螺旋桿菌感染的根除治療，也無法逆轉其病理改變，消除胃癌發生的風險，因此必須把握好幽門螺旋桿菌感染患者的治療時機，才能使治療得以最大化的獲益。且近年來幽門螺旋桿菌感染患者的耐藥性不斷增加,表明有部分幽門螺旋桿菌感染患者需要進行二次甚至多次治療，而幽門螺旋桿菌感染者進行根除治療1個療程的費用為600～1200元，經濟壓力巨大。幽門螺桿菌耐藥菌株的出現是導致根治失敗的主要原因。大環內酯類藥物的抗菌機制是通過大環內酯類抗生素能進入細胞內結合在H.pylori23SrRNA功能區V區的50S大亞基上，抑制肽酰基轉移酶，影響核蛋白體移位過程，抑制細菌蛋白合成和肽鏈延伸。而其耐藥機制為H.pylori23Sr?RNA?V區上發生了點突變，導致核糖體的構象改變，使大環內酯類抗生素結合位點也隨之改變，H.pylori與大環內酯類親合力下降，藥物不能阻止細菌的蛋白合成，最終產生耐藥性。幽門螺旋桿菌在全球廣泛存在，嚴重威脅著人民的健康，幽門螺旋桿菌根除率在近幾年的臨床實踐中沒有得到很好地改善，據知Hp根除率正逐年下降，幽門螺桿菌中耐藥基因的產生為重要的影響因素之一。因此了解患者幽門螺桿菌是否產生耐藥性是作為幽門螺旋桿菌患者的診斷和用藥的重要參考依據，及對患者的復發診斷和二次用藥都有重要的參考作用。