[發明專利]高效誘變方法在提高噬菌體輔助進化效率中的應用

在審

• 申請號: 202310042990.4
• 申請日: 2023-01-28
• 公開（公告）號: CN116162616A
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 張志乾;吳嵩;陳西朋;許波;劉麗花;何茜;張豫;賴詩靜;江翱;吳奕瑞
• 申請（專利權）人: 態創生物科技（廣州）有限公司;廣州市乾相生物科技有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N15/01;C12N15/70;C12N15/10
• 代理公司: 蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276
• 代理人: 項麗

1.高效誘變方法在提高噬菌體輔助進化效率中的應用，其中所述的高效誘變方法為物理誘變方法或化學誘變方法。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述物理誘變方法為等離子誘變、微波誘變、電離輻射誘變或紫外誘變，所述化學誘變方法為硫酸二乙酯誘變或亞硝基胍誘變；

或者所述高效誘變方法為前述物理誘變方法與化學誘變方法的組合。

3.一種提高噬菌體輔助進化效率的方法，依賴于噬菌體輔助進化體系完成，所述噬菌體輔助進化體系包括：

M13噬菌體，帶有需進化的目的基因，且gⅢ基因缺失；

轉化有gⅢ輔助質粒的宿主菌，所述輔助質粒表達gⅢ基因，且gⅢ基因的表達水平與目的基因活性呈正相關；

其特征在于該方法具體為：使用M13噬菌體侵染宿主菌株后，用高效誘變方式處理侵染噬菌體的宿主菌，然后釋放子代噬菌體，完成一輪進化，重復上述進化過程，直至得到進化后的目的基因。

4.根據權利要求3所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述的高效誘變方法為物理誘變方法或化學誘變方法，所述物理誘變方法為等離子誘變、微波誘變、電離輻射誘變或紫外誘變，所述化學誘變方法為硫酸二乙酯誘變或亞硝基胍誘變；

或者所述高效誘變方法為前述誘變方法的組合。

5.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述等離子誘變為將侵染噬菌體后的宿主菌分成3-5等份，至少取其中的三份放置于等離子誘變儀中分別誘變15-30s、30～60s、60～90s，然后全部合并在一起。

6.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述微波誘變為將侵染噬菌體后的宿主菌分成3-5等份，至少取其中的三份分別在微波發射儀中誘變10-20s、20-40s、40-50s，然后全部合并在一起。

7.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述電離輻射誘變為將侵染噬菌體后的宿主菌分成3-5等份，至少取其中的三份分別在電離輻射儀中誘變10-20s、20-40s、40-50s，然后全部合并在一起。

8.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述紫外誘變為將侵染噬菌體后的宿主菌分成3-5等份，至少取其中的三份分別在紫外線發射儀中誘變2-4、4-8、8-10min，然后全部合并在一起。

9.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述硫酸二乙酯誘變為將侵染噬菌體后的菌株離心，去除上清，再加入含體積比0.1-1％硫酸二乙酯的新鮮培養基孵育1-3小時以釋放子代噬菌體。

10.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述硫酸二乙酯誘變為將侵染噬菌體后的宿主菌先進行權利要求5-8所述的物理誘變，再將物理誘變后的菌株離心，去除上清，加入含體積比0.1-1％硫酸二乙酯的新鮮培養基孵育1-3小時以釋放子代噬菌體。

11.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述亞硝基胍誘變為將侵染噬菌體后的菌株離心，去除上清，再加入含0.01-0.1g/L亞硝基胍的新鮮培養基孵育1-3小時以釋放子代噬菌體。

12.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述亞硝基胍誘變為將侵染噬菌體后的宿主菌先進行權利要求5-8所述的物理誘變，再將物理誘變后的菌株離心，去除上清，加入含0.01-0.1g/L亞硝基胍的新鮮培養基孵育1-3小時以釋放子代噬菌體。

13.根據權利要求4所述的提高噬菌體輔助進化效率的方法，其特征在于所述宿主菌是含F質粒的大腸桿菌。