[發明專利]膀胱癌的實時熒光核酸恒溫擴增檢測試劑盒及其專用引物和探針

在審

• 申請號: 202310041301.8
• 申請日: 2023-01-12
• 公開（公告）號: CN116024345A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 居金良;崔振玲;冉鵬展;張適麒
• 申請（專利權）人: 上海仁度生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 葉占洋;魯兵

1.一種膀胱癌的實時熒光核酸恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括基于實時熒光核酸恒溫擴增方法的分別特異性檢測以下檢測基因的試劑：CDC2、MDK、IGF2、UPK1B和TERT；

所述試劑盒還包括基于實時熒光核酸恒溫擴增方法的特異性檢測GAPDH、PKG1、PPIA、UBC或ABL1的試劑，所述GAPDH、PKG1、PPIA、UBC或ABL1作為檢測內參基因。

2.根據權利要求1所述的膀胱癌的實時熒光核酸恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括基于實時熒光核酸恒溫擴增方法的分別特異性檢測以下檢測基因的試劑：HOXA13、IGFBP5、CXCR2、CRH和IANXA10。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，針對每一種基因(包括檢測基因和檢測內參基因)的特異性檢測試劑包括與該種基因對應的：

(1)核酸提取液：其包含含有特異性捕獲探針的固相支持物和第一引物，其中所述特異性捕獲探針用于捕獲基因序列，所述第一引物用于與基因序列中的靶標序列特異性結合；

(2)檢測液a：其包含第二引物，所述第二引物與所述第一引物配合，用于擴增靶標序列；

(3)檢測液b：其包含第一引物和靶標檢測探針，其中所述靶標檢測探針與靶標序列的擴增產物RNA拷貝特異性結合；

任選的，試劑盒中還包括：

(4)SAT酶液：其包含至少一種RNA聚合酶和M-MLV反轉錄酶。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，

特異性檢測以下基因的特異性捕獲探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:1-SEQ?IDNO:15所示：CDC2、HOXA13、MDK、IGFBP5、CXCR2、CRH、IGF2、UPK1B、ANXA10、TERT、GAPDH、PKG1、PPIA、UBC和ABL1；

特異性檢測以下基因的第一引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:16-SEQ?ID?NO:30所示：CDC2、HOXA13、MDK、IGFBP5、CXCR2、CRH、IGF2、UPK1B、ANXA10、TERT、GAPDH、PKG1、PPIA、UBC和ABL1；

特異性檢測以下基因的第二引物的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:31-SEQ?ID?NO:45所示：CDC2、HOXA13、MDK、IGFBP5、CXCR2、CRH、IGF2、UPK1B、ANXA10、TERT、GAPDH、PKG1、PPIA、UBC和ABL1；

特異性檢測以下基因的靶標檢測探針的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:46-SEQ?ID?NO:60所示：CDC2、HOXA13、MDK、IGFBP5、CXCR2、CRH、IGF2、UPK1B、ANXA10、TERT、GAPDH、PKG1、PPIA、UBC和ABL1，在所述靶標檢測探針的核苷酸序列兩端分別攜帶有熒光報告基團和淬滅基團。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括外源內標，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:91所示；

可選地，所述試劑盒還包括特異性檢測所述外源內標的內標捕獲探針、第一內標引物、第二內標引物和內標檢測探針，其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO:92-SEQ?ID?NO:95所示，且在所述內標檢測探針的核苷酸序列兩端分別攜帶有熒光報告基團和淬滅基團。