[發(fā)明專利]一種玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310039203.0
• 申請(qǐng)日: 2023-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN116008274A
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙翔;鄧曉柳;李陸平;辛廣遠(yuǎn);朱金東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/84
• 分類號(hào): G01N21/84;A01G22/20;G01N1/28;G01N1/36
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

1.一種玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

（一）種子萌發(fā)

取玉米種子，清水浸泡后，暗培養(yǎng)，誘導(dǎo)萌發(fā)形成黃花幼苗；

（二）培養(yǎng)成苗

將步驟（一）中已萌發(fā)的玉米黃化幼苗移栽土壤中，培育15-25天；

（三）預(yù)處理

將步驟（二）中玉米苗暗處理1?d；

（四）取樣處理和觀察

取步驟（三）中玉米葉片，剪取自下向上第三或第四片葉片的中部部分后，置于瓊脂平板上，并在葉片表面覆蓋一層含一條狹縫處可透光的錫箔紙；

對(duì)于避光運(yùn)動(dòng)，藍(lán)光照射處理1~8?h；藍(lán)光光強(qiáng)為：50~300?μmol?m^-2s^-1；

對(duì)于聚光運(yùn)動(dòng)，藍(lán)光照射處理6~12?h；藍(lán)光光強(qiáng)為：5~50?μmol?m^-2s^-1；

藍(lán)光輻照處理完成后，將處理后葉片置于光板上拍照，黑白轉(zhuǎn)換處理后，分別測量葉片狹縫處條帶和遮擋部分的灰度值，并計(jì)算狹縫處葉片的相對(duì)亮度；

計(jì)算公式為：

其中：

VGS為相對(duì)灰度值，

AC為遮擋處葉片的積分灰度值，

AL為狹縫處葉片的積分灰度值；

拍照完成后，剪取葉片被照光部分，轉(zhuǎn)移EP管中，加入Fixation?buffer固定；

固定完成后，將固定好的葉片包埋，并用振蕩切片機(jī)切片和進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察。

2.如權(quán)利要求1所述玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，步驟（一）中，所述玉米種子為B73。

3.如權(quán)利要求1所述玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，步驟（一）中，具體操作為：將玉米種子浸泡于純水中12h后，擺放于吸水紙上，包裹成紙筒，并用保鮮膜包裹紙筒，紙筒中種子胚乳在上側(cè)，胚在下側(cè)；隨后紙筒垂直置于培養(yǎng)箱內(nèi)，在28℃、相對(duì)濕度65-75RH條件下，暗培養(yǎng)3?d，形成玉米黃化幼苗。

4.如權(quán)利要求1所述玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，步驟（二）中，培養(yǎng)條件為：28℃、相對(duì)濕度65-75RH、80%全光照光強(qiáng)、光照周期16h白/8h暗，培育20-25?d。

5.如權(quán)利要求1所述玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，步驟（三）中，溫濕度要求為：22℃、65-75RH。

6.如權(quán)利要求1所述玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，步驟（四）中，錫箔紙上狹縫寬度5?mm。

7.如權(quán)利要求1所述玉米葉綠體聚光和避光運(yùn)動(dòng)的觀察鑒定方法，其特征在于，步驟（四）中，對(duì)于避光運(yùn)動(dòng)，藍(lán)光照射處理4h，藍(lán)光光強(qiáng)為：200?μmol?m^-2s^-1；對(duì)于聚光運(yùn)動(dòng)，藍(lán)光照射處理12h，藍(lán)光光強(qiáng)為：10?μmol?m^-2s^-1。