[發(fā)明專利]一種牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310038525.3
• 申請日: 2023-01-11
• 公開（公告）號: CN115920024A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 畢玉彧;宋曉飛;賈愛琴;靳傳濤;周榮榮;秦緒偉;王蕾;吳連勇
• 申請（專利權(quán)）人: 齊魯動(dòng)物保健品有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 北京君智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

本發(fā)明通過優(yōu)化牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗抗原組分，制備出一種新的牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗，免疫牛后可產(chǎn)生高水平的中和抗體；經(jīng)過懸浮培養(yǎng)工藝提升和滅活劑、佐劑篩選與純化工藝提升，提高了疫苗的安全性。安全、效力試驗(yàn)結(jié)果顯示：使用本發(fā)明的滅活疫苗免疫牛后無不良反應(yīng)，且均產(chǎn)生了高水平的中和抗體。結(jié)果說明利用本發(fā)明能夠提高牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗的免疫效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗及其制備方法，屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

牛傳染性鼻氣管炎(Infectious?Bovine?Rhinotracheitis,IBR)由牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious?Bovine?Rhinotracheitis?Virus,IBRV)引起，臨床癥狀主要為呼吸困難、流鼻液、上呼吸道及氣管黏膜發(fā)炎等，也可引起生殖系統(tǒng)癥狀。除引起相應(yīng)臨床癥狀外，牛傳染性鼻氣管炎還可導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量下降、流產(chǎn)率升高與肉牛增重減緩，給牧場造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。該病是免疫抑制病，單獨(dú)感染時(shí)危害相對較低，若發(fā)生與其他病毒病、細(xì)菌病的混合感染，危害性將大幅提高。防控該病最有效的方法為免疫疫苗。目前牧場使用的牛傳染性鼻氣管炎疫苗主要是滅活疫苗，免疫效果監(jiān)測顯示，免疫滅活疫苗后牛的中和抗體效價(jià)偏低且存在一定的過敏反應(yīng)。因此，有必要提供一種安全有效的牛傳染性鼻氣管炎疫苗用于預(yù)防牛傳染性鼻氣管炎病的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于將MDBK細(xì)胞懸浮培養(yǎng)獲得的牛傳染性鼻氣管炎病毒J1株抗原與CHO細(xì)胞培養(yǎng)獲得的牛傳染性鼻氣管炎病毒J1株gB蛋白經(jīng)滅活、純化后按一定比例混合，配以適當(dāng)佐劑配制滅活疫苗，提高牛免疫后的中和抗體水平與疫苗安全性，進(jìn)而提高預(yù)防牛傳染性鼻氣管炎病發(fā)生的成功率，確實(shí)免疫效果。

本發(fā)明的技術(shù)方案

1.一種牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗，其特征是，疫苗的有效成分包括經(jīng)滅活、純化的J1株牛傳染性鼻氣管炎病毒和經(jīng)純化的J1株牛傳染性鼻氣管炎病毒gB蛋白。

2.本發(fā)明所述的牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗，其特征在于該疫苗制備步驟包括：

(1)利用pcDNA3.1(-)載體構(gòu)建表達(dá)牛傳染性鼻氣管炎病毒J1株gB蛋白的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-gB；

(2)半成品制備：

1)J1株牛傳染性鼻氣管炎病毒液，由MDBK懸浮細(xì)胞培養(yǎng)后經(jīng)BEI滅活，并利用膜包進(jìn)行純化；

2)J1株牛傳染性鼻氣管炎病毒gB蛋白，由真核表達(dá)載體pcDNA3.1-gB轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后利用鎳柱親和層析進(jìn)行純化；

(3)配苗：將滅活、純化后的J1株牛傳染性鼻氣管炎病毒液和純化后的牛傳染性鼻氣管炎病毒J1株gB蛋白按一定比例混合，加入雙相佐劑乳化配苗。

本發(fā)明使用的生物反應(yīng)器為APPLIKON公司30L～2000L細(xì)胞生物反應(yīng)器。

本發(fā)明有益效果

本發(fā)明通過優(yōu)化牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗抗原組分，制備出一種新的牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗，免疫牛后可產(chǎn)生高水平的中和抗體；經(jīng)過懸浮培養(yǎng)工藝提升和滅活劑、佐劑篩選與純化工藝提升，提高了疫苗的安全性。安全、效力試驗(yàn)結(jié)果顯示：使用本發(fā)明的滅活疫苗免疫牛后無不良反應(yīng)，且均產(chǎn)生了高水平的中和抗體。結(jié)果說明利用本發(fā)明能夠提高牛傳染性鼻氣管炎滅活疫苗的免疫效果。

本發(fā)明涉及的生物材料資源信息

本發(fā)明的病毒毒株：牛傳染性鼻氣管炎病毒J1株為本發(fā)明人在我國國內(nèi)分離獲得，該毒株已于2017年03月15日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC?No.13786。

本發(fā)明具體實(shí)施方式