[發(fā)明專利]一種小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310037315.2
• 申請日: 2023-01-09
• 公開（公告）號: CN115896132A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高利;杜真真;許停;高海峰;陳萬權(quán)
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/82;C12N1/21;C07K14/415;C12R1/01
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 劉丹

本發(fā)明涉及小麥矮腥黑粉菌，具體涉及一種小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因。本發(fā)明提供的小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。所述小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因在抑制植物防衛(wèi)反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及小麥矮腥黑粉菌，具體涉及一種小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因。

背景技術(shù)

小麥矮腥黑粉菌(Tilletia?contraversa?Kühn，TCK)所誘發(fā)的小麥矮腥黑穗病是我國的一類檢疫性病害，也是一種重要的國際檢疫性病害。該病害對小麥生產(chǎn)具有破壞性，可使小麥產(chǎn)量減少80％以上，甚至導(dǎo)致小麥顆粒無收。目前生產(chǎn)上大多使用生化農(nóng)藥防治小麥矮腥黑穗病，還缺乏安全有效的防控手段。國內(nèi)外關(guān)于小麥矮腥黑穗病的研究成果較少，關(guān)于小麥矮腥黑粉菌和宿主間相互作用的研究資料尤為少見。因此，從基因?qū)用娣治鲂←湴群诜劬秩拘←湹臋C制，對于有效預(yù)防和控制小麥矮腥黑穗病具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了深入研究小麥矮腥黑粉菌的致病機理，我們對小麥矮腥黑粉菌的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行分析，發(fā)現(xiàn)了一個編碼效應(yīng)蛋白的基因，經(jīng)煙草瞬時表達，發(fā)現(xiàn)該效應(yīng)蛋白能夠有效抑制BAX蛋白(Bcl-2家族的促細胞凋亡成員)誘導(dǎo)產(chǎn)生的植物細胞程序性死亡(Programmedcell?death，PCD)。

本發(fā)明提供一種小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

含有所述小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因的表達盒也屬于本發(fā)明的保護范圍。

含有所述小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因的載體也屬于本發(fā)明的保護范圍。

所述載體可以是克隆載體或表達載體。

含有所述小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因的宿主菌也屬于本發(fā)明的保護范圍。

所述宿主菌可以是克隆菌株或表達菌株。

本發(fā)明還提供分離所述小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因的方法，其特征在于，包括如下步驟：提取小麥矮腥黑粉菌的RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；以cDNA為模板，使用SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示的引物進行PCR，擴增得到所述基因。

優(yōu)選地，所述PCR的反應(yīng)體系為2×PCR?Mix?25μL，10μM正向引物2μL，10μM反向引物2μL，cDNA模板0.5μg，ddH₂O補至50μL。

優(yōu)選地，所述PCR的反應(yīng)條件為95℃5min；95℃1min，57℃1min，72℃2min，35個循環(huán)；72℃10min。

由所述小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因編碼的蛋白也屬于本發(fā)明的保護范圍，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發(fā)明分離的小麥矮腥黑粉菌效應(yīng)蛋白基因，命名為g10960基因。為驗證g10960基因的功能，我們將g10960基因?qū)氡磉_載體并轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101，然后將含有g(shù)10960基因表達載體的農(nóng)桿菌GV3101的菌液注入4～6周生長狀態(tài)良好的煙草葉片中，通過煙草葉片瞬時表達，利用BAX蛋白誘導(dǎo)細胞凋亡的作用，驗證了g10960基因表達的效應(yīng)蛋白能夠有效抑制BAX誘導(dǎo)產(chǎn)生的植物細胞程序性死亡，表明該效應(yīng)蛋白在抑制植物防衛(wèi)反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。本發(fā)明為深入研究小麥矮腥黑粉菌的致病機理，開發(fā)抗小麥黑穗病的小麥品種提供了基因資源。

附圖說明

圖1是小麥矮腥黑粉菌g10960基因的PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果。