[發明專利]一株紅平菇高產真菌及其在產纖維素酶中的應用

在審

• 申請號: 202310030705.7
• 申請日: 2023-01-10
• 公開（公告）號: CN115927017A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 應漢杰;魏荷芬;潘晶;陳勇;劉慶國;溫慶仕;項玲;余斌;周萍;袁童;徐雯暉;張寧
• 申請（專利權）人: 南京高新工大生物技術研究院有限公司;南京工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12N1/04;C12N1/36;C12N15/01;C12N9/42;C12R1/645
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 肖明芳

1.一株紅平菇高產真菌，分類命名為紅平菇Pleurotus?djamor，菌株號GXGD-EF-13-JD-1，已于2022年11月09日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC?No：62953。

2.權利要求1所述的紅平菇高產真菌的選育方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)出發菌株初篩：通過在PDA平板和剛果紅平板上，對15株大型食用真菌進行初篩，獲得出發菌株GXGD-13；

(2)尖端分離復壯馴化：將步驟(1)獲得的出發菌株GXGD-13依次在純瓊脂培養基、PDA培養基、PDA加富1、PDA加富2、改良PDA培養基上進行尖端菌絲體分離復壯，獲得優選菌株GXGD-13-1；

(3)突變菌株的選育：以步驟(2)優選的菌株GXGD-13-1為出發菌株，通過制備原生質體聯合ARTP誘變法，獲得優良的突變菌株10株，再結合平板觀察驗證法和液體驗證培養法，對10株突變菌株的生長速度，生物量，粗蛋白及纖維素酶活情況進行表征，篩選得到一株高纖維素酶活，生長快，生物量大，蛋白含量高的紅平菇突變菌株GXGD-EF-13-JD-1；

(4)菌株的鑒定與保藏：將步驟(3)獲得的突變菌株GXGD-EF-13-JD-1進行平板對峙拮抗實驗和分子鑒定后進行保藏。

3.根據權利要求2所述的選育方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的PDA平板，其配方為：土豆汁200g/L、葡萄糖20g/L、磷酸二氫鉀3g/L、硫酸鎂1.5g/L、VB₁?0.1g/L；所述的剛果紅平板，其配方為：羧甲基纖維素鈉10g/L、KH₂PO₄?2g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、MnSO₄?0.5g/L、剛果紅0.4g/L、瓊脂20g/L，加蒸餾水至1000mL，用醋酸調節pH值為6.0。

4.根據權利要求2所述的選育方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的原生質體的制備，采用的酶體系為：總酶量為0.67g/100mL的M1、總酶量為2.17g/100mL的M2、總酶量為1.83g/100mL的M3、總酶量為4.0g/100mL的M4、總酶量為3.17g/100mL的M5；優選總酶量為2.17g/100mL的M2的酶體系，其原生質體的再生數量為4.65*10⁷個/mL，再生率為1.67％，再生時間為14d。

5.根據權利要求4所述的選育方法，其特征在于，所述的M2的酶體系，其酶體系配方為：牛血清蛋白50mg、蝸牛酶50mg、崩潰酶50mg、Lysing?enzymes?50mg、Yatalase50mg、β-glucuronidase?100μL、果膠酶100mg、纖維素酶200μL、穩定劑30mL，pH5.0-6.0；其中，所述的穩定劑配方為：10mM?NaH₂PO₄、0.8M?NaCl，pH6.0。

6.根據權利要求2所述的選育方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的ARTP誘變，其參數設置為：工作功率100W、工作氣流10SLM、照射距離2mm條件下，設置照射時間0-180s。

7.根據權利要求2所述的選育方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的平板觀察驗證法，具體為：選取出發菌株GXGD-13-1與篩選出的10株菌同時接種于PDA平板和剛果紅平板上，并進行對比觀察、記錄；所述的液體驗證培養法，具體為：選取出發菌株GXGD-13-1與篩選出的10株菌，同時接種于一級種子液中，26℃、150rpm培養8d后，再按10％v/v的接種量轉接至二級種子液中，進行對比觀察，培養4d對樣品進行指標檢測。