[發(fā)明專利]一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)和收獲的生產(chǎn)工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310019919.4
• 申請日: 2023-01-06
• 公開（公告）號: CN116064409A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏穎;闕紅;喻超;李華順
• 申請（專利權(quán)）人: 四川阿思科力生物科技有限公司;蘇州因特藥物研發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 北京布瑞知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11505
• 代理人: 秦衛(wèi)中

1.一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，包括以下步驟：經(jīng)細(xì)胞復(fù)蘇和種子擴(kuò)增后，達(dá)到用于生產(chǎn)的細(xì)胞數(shù)量，然后置于生物反應(yīng)器中進(jìn)行連續(xù)循環(huán)生產(chǎn)的第一個(gè)循環(huán)；第一個(gè)循環(huán)結(jié)束后，從生物反應(yīng)器中收獲部分細(xì)胞用于成品制備，再向該反應(yīng)器中補(bǔ)足新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)在同一生物反應(yīng)器中的連續(xù)接種、培養(yǎng)以及收獲的大規(guī)模高產(chǎn)量連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述種子擴(kuò)增為多級傳代種子擴(kuò)增，種子擴(kuò)增培養(yǎng)方式為懸浮培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述種子擴(kuò)增培養(yǎng)的容器為搖瓶或搖瓶和反應(yīng)器的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述細(xì)胞復(fù)蘇的培養(yǎng)過程如下所示：從液氮罐中取出凍存的細(xì)胞，待細(xì)胞復(fù)融后進(jìn)行培養(yǎng)，使細(xì)胞活率恢復(fù)到80％以上，細(xì)胞密度高于5×10⁵cells/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述種子擴(kuò)增的培養(yǎng)過程如下所示：將復(fù)蘇培養(yǎng)的細(xì)胞至不同體積的容器中進(jìn)行傳代擴(kuò)增，每次傳代體積擴(kuò)大2-10倍。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，當(dāng)所述種子擴(kuò)增培養(yǎng)的容器為搖瓶時(shí)，所述懸浮培養(yǎng)使用的搖床參數(shù)為37℃，5％CO₂，30～100rpm。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，當(dāng)所述種子擴(kuò)增培養(yǎng)的容器包含反應(yīng)器時(shí)，所述反應(yīng)器為一個(gè)或多個(gè)不同體積的WAVE反應(yīng)器。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述生物反應(yīng)器為WAVE反應(yīng)器；優(yōu)選地，所述WAVE反應(yīng)器為50L的WAVE反應(yīng)器。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述細(xì)胞包括治療用免疫細(xì)胞或經(jīng)工程化改造的免疫細(xì)胞，所述免疫細(xì)胞包括B細(xì)胞、T細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、粒細(xì)胞、先天淋巴樣細(xì)胞或樹突細(xì)胞。

10.一種大規(guī)模高產(chǎn)量細(xì)胞連續(xù)收獲工藝，其特征在于，在權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝的連續(xù)循環(huán)生產(chǎn)環(huán)節(jié)，對每個(gè)循環(huán)的細(xì)胞產(chǎn)物進(jìn)行部分收獲，剩余的細(xì)胞作為下一輪培養(yǎng)的種子，實(shí)現(xiàn)在同一生物反應(yīng)器中細(xì)胞的連續(xù)循環(huán)培養(yǎng)和分段收獲。