[發明專利]一種聯合放療的納米材料應用新策略

在審

• 申請號: 202310010024.4
• 申請日: 2023-01-04
• 公開（公告）號: CN116492371A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 丁慧妍;賀晨;唐秋莎;王云娟;李涵;黃嘉燕;丁一楠;陳靜
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: A61K33/242
• 分類號: A61K33/242;A61P35/00;A61N5/10;B22F9/24;B22F1/054;B82Y40/00;B82Y5/00
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 楊敬

本發明公開一種聯合放療的納米材料應用新策略，屬于納米生物醫學技術領域，本發明公開了一種納米材料納米金AuNPs新型治療策略，屬于納米生物醫學技術應用領域。由于放療只能在人體正常組織耐受的劑量范圍內治療且在長期治療的過程中腫瘤細胞會出現輻射抵抗性，使得放療對腫瘤的治愈率降低。本發明利用納米金AuNPs聯合放療經體外實驗驗證納米金AuNPs在提高放療增敏的同時也能夠提高放療誘導腫瘤細胞發生免疫原性細胞死亡(Immunogenic?celldeath,ICD)的效應，提高腫瘤細胞的免疫原性，以達到更好的治療效果。為腫瘤的治療提供了新的策略。

技術領域

本發明屬于納米生物醫學技術領域，具體涉及一種聯合放療的納米材料應用新策略。

背景技術

放療作為臨床癌癥治療的一種主要方式，放療過程所使用的離子輻射之所以能被用來作為腫瘤的治療手段，是因為它可以使腫瘤細胞產生DNA損傷并誘導細胞凋亡。然而放療有明顯的缺點，如需在組織耐受的范圍內進行放療以及在長期的放療過程中，腫瘤細胞會產生一定的輻射抵抗性。已有文章證明放療具有一定誘導腫瘤細胞發生免疫原性細胞死亡(Immunogeniccelldeath，ICD)的能力，然而十分微弱。ICD是一種調節性細胞死亡(Regulatedcelldeath,RCD)，ICD不僅可以殺死由ICD誘導劑誘導的細胞，還可以殺死作為腫瘤疫苗的垂死癌細胞，從而引起針對活癌細胞和殘留腫瘤組織的腫瘤特異性免疫反應。因此需要一種既可以提高放療敏感性又可以提高腫瘤細胞發生ICD的納米材料達到協同治療的效果。

納米金AuNPs作為一種在生物醫學領域廣泛應用的高原子序數(Z＝79)納米材料，已有大量研究闡明其聯合放療有增強放療對腫瘤細胞敏感性的作用。然而納米金AuNPs是否有提高放療誘導的ICD效應的能力，無文獻報道。因此本實驗提出一種納米金AuNPs聯合放療的新應用策略。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種聯合放療的納米材料應用新策略。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

納米金AuNPs制備方法，所述的AuNPs可聯合放療提高腫瘤細胞對放療的敏感性，同時提高放療誘導腫瘤細胞發生ICD的效應。其具體步驟如下：

取1mL1％氯金酸水溶液溶于100mL超純水中，將其轉入250mL圓底燒瓶中，并在瓶中加入磁力轉子，將油浴鍋放置于磁力攪拌器上。燒瓶上方架置冷凝管于油浴鍋上在磁力攪拌的同時加熱至100℃，在此同時加入4mL1％檸檬酸鈉水溶液，并繼續加熱35分鐘直至溶液變為粉紅色，即刻停止加熱，冷卻至室溫，其水溶液即為AuNPs。

用上述制備的AuNPs制備銅網樣品，于透射電鏡下觀察納米金AuNPs的形態，用紫外-可見分光分光光度儀檢測納米金AuNPs在520nm處有最大吸收峰，納米粒度及電位分析儀檢測納米金AuNPs粒徑為19.72±1.963nm，Zeta電位為-35.1±0.656mV。

用CCK8法檢測納米金聯合放療對于小鼠腦膠質母細胞瘤細胞(G422)的殺傷能力，并檢測其聯合放療的IC₅₀。

使用流式細胞術檢測納米金AuNPs聯合放療對ICD相應指標肌鈣蛋白(Calreticulin,CRT)表達情況。

使用Elisa試劑盒檢測納米金AuNPs聯合放療對ICD相應指標高遷移率組框1(Highmobilitygroupbox1,HMGB1)釋放情況。

使用ATP試劑盒檢測納米金AuNPs聯合放療對ICD相應指標三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate,ATP)釋放情況。

使用流式細胞術檢測納米金AuNPs聯合放療對ICD相應指標DC細胞成熟度的影響；

使用驗證ICD的金標準腫瘤疫苗來檢測納米金聯合放療對于腫瘤細胞的抗腫瘤效應。