[發明專利]一種口腔鱗癌頸部淋巴結轉移灶類器官的培養基及構建方法

在審

• 申請號: 202211736456.5
• 申請日: 2022-12-31
• 公開（公告）號: CN115786264A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 邵思源;周榕;鐘來平;何愛娜
• 申請（專利權）人: 上海萬何圓生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 上?；ロ槍＠硎聞账?普通合伙) 31332
• 代理人: 韋志剛;曹月明

1.一種口腔鱗癌頸部淋巴結轉移灶類器官的培養基，其特征在于，所述培養基在Advanced DMEM/F12基礎培養基下加入以下重量百分比的物質：1-2％的Hepes緩沖液、1-2％的青霉素鏈霉素溶液、1-2％的Glutamax、2-3％的B27、1-2％的N2、5-10mmol/L的煙酰胺、10-20ng/mL的NRG1、1-2mmol/L的N-乙酰半胱氨酸、10-20uM的Y-27632、100-120ng/ml的Noggin、100-120ng/ml的R-spondin1、500-550nmol/L的A83-01、100-120ng/ml的EGF、50-60ng/ml的FGF10、100-120ng/ml的FGF2、10-15uM的Forskolin。

2.一種口腔鱗癌頸部淋巴結轉移灶類器官的構建方法，所述構建方法包括以下步驟：

在消化液中，將腫瘤組織消化，得到消化組織懸液，

將所述消化組織懸液進行細胞過濾離心，保留沉淀，得到細胞沉淀；

利用緩沖液重懸所述細胞沉淀，統計活細胞數；

根據統計的活細胞數，將類器官接種至孔板中,加入培養基，將孔板靜置于培養箱中進行培養；

培養3天后，類器官培養體系中腫瘤浸潤淋巴細胞只剩余5％活性細胞，將類器官消化后，終止消化，離心；

利用緩沖液重懸所述細胞沉淀，統計活細胞數；

根據統計的活細胞數，將類器官接種至孔板中,加入培養基，將孔板靜置于培養箱中進行培養；

所述培養基在Advanced DMEM/F12基礎培養基下加入以下重量百分比的物質：

1-2％的Hepes緩沖液、1-2％的青霉素鏈霉素溶液、1-2％的Glutamax、2-3％的B27、1-2％的N2、5-10mmol/L的煙酰胺、10-20ng/mL的NRG1、1-2mmol/L的N-乙酰半胱氨酸、10-20uM的Y-27632、100-120ng/ml的Noggin、100-120ng/ml的R-spondin1、500-550nmol/L的A83-01、100-120ng/ml的EGF、50-60ng/ml的FGF10、100-120ng/ml的FGF2、10-15uM的Forskolin。

3.根據權利要求2所述的一種口腔鱗癌頸部淋巴結轉移灶類器官的構建方法，其特征在于，所述消化液由5g/ml的膠原酶I和10ug/ml的DNA酶I組成，所述消化液以無血清DMEM培養基為溶劑。

4.根據權利要求2所述的一種口腔鱗癌頸部淋巴結轉移灶類器官的構建方法，其特征在于，所述緩沖液為無菌PBS緩沖液。