[發明專利]一種精子DNA提取試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 202211720228.9
• 申請日: 2022-12-30
• 公開（公告）號: CN115976012A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 李曉萌;歐陽德懿;鄧陽紅;李振
• 申請（專利權）人: 杭州聯川生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 杭州信與義專利代理有限公司 33450
• 代理人: 萬景旺

本發明公開了一種精子DNA提取試劑盒及提取方法，屬于分子生物學技術領域。其中，所述提取試劑盒包括裂解液，所述裂解液中包括0.9～2.5％的SDS、0.156～0.267M的DTT，0.19～0.21mg/mL的蛋白酶和5～12ng/μL的RNase?A。利用本發明的試劑盒和方法提取精子DNA，得到的DNA總量高、瓊脂糖凝膠檢測主條帶完整、純度高，能夠用于研究精子來源物種的遺傳特性，為分子育種提供技術支持。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體地，涉及一種精子DNA提取試劑盒及提取方法。

背景技術

近年來，我國種業存在一定的結構性失衡，農作物育種相對領先，在多個領域與國際先進水平持平或差距較小，而畜牧業育種則相對落后，同時，不同畜種育種發展水平也存在不平衡。例如，我國商品豬種源大約八成依賴進口；國外奶牛種公牛凍精產品占我國凍精產品市場的50％以上。所以在建設種業強國的過程中，必須盡力補齊畜禽種業這塊短板。

基因組DNA是動物遺傳物質的主要載體，其在基因工程、環境檢測、環境凈化、農業、畜牧業、食品業、藥品和基因治療等領域都有廣泛的應用。隨著分子生物學和分子育種的發展，基因組DNA的提取與保存成為動物科學實驗和育種生產過程中越來越重要的內容。

然而，常規的基因組DNA提取方法或DNA提取試劑盒無法獲得高質量的精子DNA，導致精子DNA在消化中釋放困難、抽提產率低、純度低，難以滿足高要求的分子生物學。

發明內容

為了解決上述技術問題中的至少一個，本發明采用的技術方案如下：

本發明第一方面提供一種精子DNA提取試劑盒，包括裂解液，所述裂解液中包括0.9～2.5％的SDS、0.156～0.267M的DTT，0.19～0.21mg/mL的蛋白酶和5～12ng/μL的RNaseA。

在本發明的一些具體實施方案中，所述裂解液中包括1.5％的SDS、0.2M的DTT，0.2mg/mL的蛋白酶和10ng/μL的RNase?A。

在本發明的一些實施方案中，所述試劑盒還包括漂洗液和洗脫液。

在本發明的一些具體實施方案中，所述漂洗液為有機醇溶液，例如乙醇、丁醇等。在本發明的一些優選實施方案中，所述漂洗液為80％乙醇。

在本發明的一些具體實施方案中，所述洗脫液選自TE緩沖液、Tris-HCl緩沖液和水。在本發明的一些具體實施方案中，所述洗脫液為pH＝8.0的Tris-HCl。

本發明第二方面提供利用本發明第一方面所述精子DNA提取試劑盒提取精子DNA的方法，包括以下步驟：

S1，將精液凍存樣本進行融化，取200μL于2mL離心管，32℃～41℃水浴鍋中孵育20～35min，至溶液不粘稠，280～350×g離心至產生沉淀，吸棄上清溶液，保留沉淀；

S2，向沉淀中加入所述裂解液，55℃～60℃金屬浴中孵育2.5～4h，再在70℃孵育15～25min；

S3，向上清液中加入0.6×體積氯仿，顛倒混勻樣本或于渦旋儀上渦旋混勻樣本，直至溶液完全乳化成白色；

S4，12000～14000×g，室溫離心8～15min，吸取800μL上清液轉移至新的1.5mL離心管中；

S5，向步驟S4中新的1.5mL離心管中加入0.6×體積混合均勻的磁珠，用移液器輕輕吹打混勻10次以上，室溫靜置3～8min；

S6，將離心管置于磁力架上靜置3～8min，直至溶液澄清，吸棄上清；

S7，保持離心管在磁力架上，加入200μL所述漂洗液，室溫靜置20～40s后，吸棄上清；