[發(fā)明專利]一種RT-PCR預(yù)混液

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211717458.X
• 申請日: 2022-12-29
• 公開（公告）號: CN116355998A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曾水玉;劉亞;俞亞波;姜曉捷
• 申請（專利權(quán)）人: 上海科新生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 高一平;徐迅

本發(fā)明涉及一種RT?PCR預(yù)混液。具體地，所述RT?PCR預(yù)混液同時包含反轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶，且所述PCR預(yù)混液具有保存時間長、靈敏度優(yōu)異且特異性強的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種RT-PCR預(yù)混液。

背景技術(shù)

隨著PCR技術(shù)的快速發(fā)展，市場上出現(xiàn)了各種體外診斷用的PCR試劑盒。為了方便操作，可以將Taq酶加入PCR試劑中，組成PCR預(yù)混液。PCR預(yù)混液通常包括dNTP、Taq酶和緩沖液等必要成分?，F(xiàn)有的PCR預(yù)混液在常溫下僅能在5-6小時內(nèi)進行有效擴增，超過6小時的常溫放置之后，靈敏度、特異性等性能會變得很差。

反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)以RNA為模板進行擴增，在基因表達水平的檢測、RNA病毒含量檢測以及直接克隆特定基因cDNA等方面有著廣泛的應(yīng)用。反轉(zhuǎn)錄PCR分為兩個步驟，首先在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下將RNA反轉(zhuǎn)錄為單鏈的cDNA，然后在DNA聚合酶的作用下將單鏈cDNA擴增為雙鏈的DNA分子。當(dāng)反轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶在一管中進行反應(yīng)時會相互干擾，引起RT-PCR靈敏度的降低。

一些RT-PCR試劑往往會添加BSA、明膠、甘油、多聚糖等添加劑可以提高反應(yīng)體系的穩(wěn)定性，例如專利CN114480589A公開了一種PCR反應(yīng)體系穩(wěn)定劑及其應(yīng)用，通過添加蔗糖、海藻糖、聚乙烯亞胺、二硫蘇糖醇和二甲基亞砜制備的PCR預(yù)混液可以使其在室溫條件下存放至少6個月，然而該專利提到的PCR反應(yīng)體系只含有DNA聚合酶，不包含逆轉(zhuǎn)錄酶，逆轉(zhuǎn)錄酶對溫度等條件較為敏感，這些物質(zhì)的添加不一定能保證逆轉(zhuǎn)錄酶也能在室溫下穩(wěn)定存放。

因此，希望有一種RT-PCR預(yù)混試劑，可以室溫或者更高溫度下穩(wěn)定放置更長的時間，既能夠延長試劑的存儲，操作更加方便，又能減少因試劑在-20℃和常溫下頻繁轉(zhuǎn)換，反復(fù)凍融帶來的性能損失。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種保存時間長、靈敏度優(yōu)異且特異性強的RT-PCR預(yù)混液。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種RT-PCR預(yù)混液，包含如下組分：

其中，重量比按所述預(yù)混液的總重量計。

在另一優(yōu)選例中，所述反轉(zhuǎn)錄酶為MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶。

在另一優(yōu)選例中，所述DNA聚合酶為熱啟動Taq?DNA聚合酶。

在另一優(yōu)選例中，所述RT-PCR預(yù)混液的pH為7.5-10。

在另一優(yōu)選例中，所述RT-PCR預(yù)混液的pH為8.1-9.2。

在另一優(yōu)選例中，包含如下組分：

其中，重量比按所述預(yù)混液的總重量計。

在另一優(yōu)選例中，包含如下組分：

其中，重量比按所述預(yù)混液的總重量計。

在另一優(yōu)選例中，醋酸錳和乙腈的摩爾比為200-8000。

在另一優(yōu)選例中，醋酸錳和乙腈的摩爾比為200-1000。

本發(fā)明的第二方面，提供了一種本發(fā)明第一方面所述RT-PCR預(yù)混液的用途，用于制備核酸檢測試劑盒。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1中試劑組合1-8，在2-8℃保存12個月擴增結(jié)果。