[發明專利]公豬精子活力miRNA標志物及其應用

在審

• 申請號: 202211693798.3
• 申請日: 2022-12-28
• 公開（公告）號: CN115948573A
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 郭金彪;李智麗;秦佳麗;趙云翔
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 林玉芳;辜丹蕓

本發明公開了6種公豬精子活力miRNA標志物，其為ssc?miR?486、ssc?miR?10386、ssc?miR?708?5p、ssc?miR?122?5p、ssc?miR?199a?3p和ssc?miR?31，所述ssc?miR?486、ssc?miR?10386、ssc?miR?708?5p、ssc?miR?122?5p和ssc?miR?199a?3p在低活力精液精漿外泌體中高表達，在高活力精液精漿外泌體中低表達，所述ssc?miR?31在低活力精液精漿外泌體中低表達，在高活力精液精漿外泌體中高表達。本發明對鑒定公豬精子活力具有良好前景，所公開的miRNA標志物具有準確性、可靠性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及公豬精子活力miRNA標志物及其應用。

背景技術

公豬精子活力是精子運動參數指標，精子通過在附睪、前列腺等副性腺中不斷發育逐漸具備向前游動的能力。精漿外泌體來源于雄性生殖道中，是構成精子周圍環境的重要部分，可以通過蛋白質、miRNA等分子運送至精子進行物質交換和信息調節，完善精子的結構與功能，對精子活力起到重要的調節作用。精漿外泌體中含有大量的miRNA，研究發現活力不同的精液在一些物種中均存在miRNA表達差異，精子活力異常可能是由于發育過程中受到這些miRNA表達失調影響導致精子發育不全。

miRNA可以通過與AGO家族蛋白形成復合物的方式沉默mRNA，調控mRNA的穩定性和蛋白質的合稱，最終影響到精子的基本參數以及受精過程中的各個環節。分泌外泌體的源細胞的功能狀態的不同能夠通過其分泌外泌體的miRNA種類、含量得到體現，因此精漿外泌體中miRNA在成為精子活力的無創標志物進而預測公豬繁殖力中擁有非常廣闊的發展空間。

雖然對于總體上精漿外泌體已有一定的研究成果，但其在豬這一物種中的研究仍然較為匱乏。有研究對豬精漿外泌體中的miRNA進行鑒定分析([1]吳志勝,陳慧芳,劉俊杰,等.長白豬精漿外泌體miRNAs的鑒定與功能分析[J].農業生物技術學報,2021.)，發現一些高豐度miRNA對精子功能具有潛在的調控作用，但其并未揭示不同miRNA在不同活力豬精液精漿外泌體中的表達差異，因此目前對不同miRNA在不同活力豬精液精漿外泌體中表達差異的研究依舊存在空白。

發明內容

基于此，本發明提供了一種公豬精子活力miRNA標志物及其應用，其對豬精子活力的鑒定具有可靠性、準確性。

本發明的第一方面，提供公豬精子活力miRNA標志物，其特征在于，包括：ssc-miR-486、ssc-miR-10386、ssc-miR-708-5p、ssc-miR-122-5p、ssc-miR-199a-3p和ssc-miR-31。

在其中一些實施例中，所述ssc-miR-486、ssc-miR-10386、ssc-miR-708-5p、ssc-miR-122-5p和ssc-miR-199a-3p在低活力公豬精液精漿外泌體中高表達，在高活力公豬精液精漿外泌體中低表達，所述ssc-miR-31在低活力公豬精液精漿外泌體中低表達，在高活力公豬精液精漿外泌體中高表達，所述高表達是指低活力公豬精液精漿外泌體中的表達量/高活力公豬精液精漿外泌體中的表達量＞1.5，所述低表達是指低活力公豬精液精漿外泌體中的表達量/高活力公豬精液精漿外泌體中的表達量＜0.85。

本發明提供了5種在低活力公豬精液精漿外泌體中高表達，在高活力公豬精液精漿外泌體中低表達的miRNA，另外還提供了一種在低活力公豬精液精漿外泌體中低表達，在高活力公豬精液精漿外泌體中高表達的miRNA，由于同時采用不同的miRNA作為標志物，且包含表達情況不同的miRNA標志物，提高了對豬精子活力鑒定的準確率，降低了假陽性的概率。

本發明的第二方面，要求保護上述標志物在制備鑒定公豬精子活力的試劑盒中的應用。