[發明專利]一種小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白及其應用

有效

• 申請號: 202211663353.0
• 申請日: 2022-12-23
• 公開（公告）號: CN115785288B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 任立松;鄭金來;趙兵;杜皓云;杜前麗;李華斌;李麗燕;郝金寶;張卉;盧小雨;呂魯杰;陳國慶;莫燕;許元元
• 申請（專利權）人: 北京標馳澤惠生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;G01N33/569
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 葉占洋;魯兵

本發明公開一種小反芻獸疫病毒H?N的抗原表位融合蛋白及其應用，屬于生物技術領域。本發明提供的小反芻獸疫病毒H?N的抗原表位融合蛋白為小反芻獸疫病毒的H蛋白和N蛋白的多個疏水區遠端抗原表位經串聯得到。由本發明提供的融合蛋白制備的抗體檢測試劑盒對小反芻獸疫病毒抗體的陽性檢出率明顯提高，從而可以避免漏檢。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白及其應用，尤其涉及一種用于小反芻獸疫病毒抗體檢測的融合蛋白及其在檢測小反芻獸疫病毒抗體中的應用。

背景技術

小反芻獸疫(PPR)是OIE法定報告的傳染病，也被我國政府列為一類動物傳染病，其是由小反芻獸疫病毒(Peste?des?Petits?Ruminants?Virus，PPRV)引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，具有高發病率和高死亡率的特點。小反芻獸疫的發生不但將給發生國的畜牧業生產帶來嚴重的經濟損失，還會對國際貿易產生嚴重的影響，因此該病引起許多國家的高度重視，對小反芻獸疫病毒進行檢測和監測是動物防疫的主要工作之一。

目前對小反芻獸疫病毒進行檢測的方法多以免疫學檢測方法為主，其是把滅活的小反芻獸疫全病毒、小反芻獸疫病毒H蛋白的表位合成肽(例如專利文獻CN112255401A)、小反芻獸疫病毒N蛋白(例如專利文獻CN102967710A)、或小反芻獸疫病毒H、N蛋白的串聯融合蛋白NH(參見孫雨等人，小反芻獸疫病毒雙抗原夾心時間分辨熒光免疫，動物醫學進展，2019，40(4)：1-8)作為包被原，建立間接ELISA或競爭ELISA方法，檢測動物血清中的PPRV病毒抗體，通過血清抗體效價，判定動物是否攜帶小反芻獸疫病毒或接種疫苗后的動物產生抗體狀況。然而，一方面，小反芻獸疫全病毒獲取比較困難，全病毒需要分離、培養、純化、滅活等，都需要在等級較高的實驗室或生產車間完成，而檢測試劑盒生產廠家大部分不具備分離培養純化病毒的能力，因此檢測成本過高；另一方面，雖然小反芻獸疫病毒H、N蛋白或兩者的串聯融合蛋白可以避免全病毒生產的弊端，但當單獨以H、N蛋白或其表位合成肽作為包被抗原時，由于其抗原表位的局限性，可能產生漏檢現象；簡單地以全長H和N蛋白的串聯融合蛋白作為包被抗原時，也可能會產生漏檢現象。

發明內容

針對現有技術中存在的問題的一個或多個，本發明的一個方面提供一種小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白，其由小反芻獸疫病毒H蛋白的4個疏水區遠端抗原表位H1、H2、H3和H4中的至少2個，和小反芻獸疫病毒N蛋白的4個疏水區遠端抗原表位N1、N2、N3和N4中的至少3個按照任意順序經接頭串聯融合而成；其中：

所述抗原表位H1、H2、H3和H4的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:1-4所示，所述抗原表位N1、N2、N3和N4的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:5-8所示。

在一些實施方式中，所述接頭的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:9所示。

在一些實施方式中，所述小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白還攜帶有用于蛋白純化的標簽。

在一些實施方式中，所述標簽包括His標簽。

在一些實施方式中，所述小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:10-16、22-23中任一個所示。

本發明另一方面提供一種編碼上述的小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白的基因。

本發明的再一方面提供了上述的小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白在制備檢測小反芻獸疫病毒抗體的試劑盒或試劑中的應用。具體地提供一種用于檢測小反芻獸疫病毒抗體的ELISA試劑盒，其中使用上述的小反芻獸疫病毒H-N的抗原表位融合蛋白作為包被抗原。

本發明又一方面還提供一種檢測小反芻獸疫病毒抗體的非疾病診斷目的方法，其包括使用ELISA試劑盒對待測樣品進行檢測，并計算所述待測樣品的S/P值，其中S/P值的計算公式為：