[發明專利]血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法

有效

• 申請號: 202211661490.0
• 申請日: 2022-12-23
• 公開（公告）號: CN116124927B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 秦永平;高添桃;梁秀芳;姜寧
• 申請（專利權）人: 上海嘉葆藥銀醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 許澤偉

1.血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、將待測血漿和內標物WXFL混勻，離心后，取上清液與水混勻，得待測樣品；所述待測血漿由以下方法制備得到：將血漿與穩定劑1混勻即得；所述穩定劑1為飽和醋酸銨生理鹽水溶液-冰醋酸、飽和醋酸銨生理鹽水溶液-甲酸、濃氨水-甲酸中的至少一種；所述飽和醋酸銨生理鹽水溶液-冰醋酸由以下方法制備得到：將飽和醋酸銨生理鹽水溶液和冰醋酸按體積比10：3～5混勻即得；所述飽和醋酸銨生理鹽水溶液-甲酸由以下方法制備得到：將飽和醋酸銨生理鹽水溶液和甲酸按體積比10：3～5混勻即得；所述濃氨水-甲酸由以下方法制備得到：將濃氨水和甲酸按體積比10：3～5混勻即得；

B、待測樣品經高效液相色譜-串聯質譜儀檢測樣品中JDB0131和/或代謝物WXWD的色譜峰，并據此計算所述待測血漿中JDB0131和/或代謝物WXWD濃度；

步驟A中，制備待測血漿所用血漿由以下方法制備得到：將全血與穩定劑2混合，然后離心即得；所述穩定劑2由以下方法制備得到：將穩定劑1和生理鹽水按體積比1：2混合即得；制備待測血漿所用血漿時，所述穩定劑2的用量為20～40μL/mL全血；

步驟A中，制備待測血漿時，所述穩定劑1與血漿的體積比為40～50uL：1mL；

步驟B中，高效液相色譜條件為：色譜柱為ACQUITY?UPLC?BEH?C18，50×2.1mm，1.7μm；流動相：A水相：甲酸：氨水：水體積比＝0.5：0.5：1000，B有機相：乙腈；

步驟B中，質譜條件為：檢測方式：多反應離子監測MRM，正離子模式掃描；離子源：ESI源；

所述JDB0131為所述WXWD為所述WXFL為

2.根據權利要求1所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟A中，所述內標物WXFL以內標工作液形式加入，所述內標工作液為：以乙腈為溶劑配置WXFL濃度為2～100ng/mL的內標工作液；所述內標工作液的加入量為不少于待測血漿體積的3倍。

3.根據權利要求2所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟A中，所述內標工作液的加入量為待測血漿體積的3～20倍。

4.根據權利要求1所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟A中，所述上清液與水的體積比為30：70～20：80。

5.根據權利要求1所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟A中，待測血漿和內標物WXFL混勻后，控制離心轉速不小于10000rpm，離心時間不少于5min，離心溫度2～8℃。

6.根據權利要求1所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟B中，高效液相色譜條件為：

柱溫：40℃；進樣量不超過20μL；

梯度洗脫程序為：

。

7.根據權利要求1所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟B中，質譜條件為：檢測參數為：

8.根據權利要求1～7任一項所述的血漿中JDB0131、其代謝物的濃度測定方法，其特征在于：步驟B中，采用內標法，以JDB與內標物WXFL的響應比和/或代謝物WXWD與內標物WXFL的響應比帶入各自標準曲線方程，計算所述待測血漿中的JDB0131和/或代謝物WXWD濃度。