[發(fā)明專利]檢測腦組織中tRF表達引物在制備甲基苯丙胺成癮輔助診斷試劑盒的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211645154.7
• 申請日: 2022-12-19
• 公開（公告）號: CN116287186A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉惠芬;洪青曉;周昀;吳婷婷;徐文錦;陳為升;賴苗軍;謝小虎;王馬潔;徐澤民;周文華
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波市康寧醫(yī)院(寧波市精神疾病預(yù)防控制中心;寧波市微循環(huán)與莨菪類藥研究所)
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 葉桂萍

本發(fā)明涉及一種檢測組織中tRF表達引物在制備甲基苯丙胺成癮輔助診斷試劑盒的應(yīng)用，其特征在于：該tRF?1_32?Gly?GCC?2?M2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述tRF?1_32?Gly?GCC?2?M2在甲基苯丙胺成癮大鼠組織中的特異性表達下調(diào)：所述引物為：F1：5’GATCGCATGGGTGGTTCAGT?3'；R1：5’CTCTTCCGATCTAGGCGAGAAT?3’，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于甲基苯丙胺成癮大鼠組織中的特異性表達下調(diào)tRF?1_32?Gly?GCC?2?M2可作為甲基苯丙胺成癮診斷的新型分子標(biāo)記物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甲基苯丙胺成癮大鼠腦組織中tRNA衍生片段的檢測方法，尤其涉及一種熒光染料法實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測甲基苯丙胺成癮大鼠腦組織中tsRNA的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近幾年，甲基苯丙胺是我國濫用人數(shù)最多的毒品。吸毒造成藥物依賴者勞動能力下降或者喪失，家庭經(jīng)濟遭受損失，誘發(fā)犯罪，而且增加HIV的傳播機會，給社會帶來嚴(yán)重的不穩(wěn)定因素，阻礙社會進步和經(jīng)濟發(fā)展。至今，關(guān)于海洛因依賴治療方法已比較成熟，主要有美沙酮和丁丙諾啡維持治療等，均得到很好的廣泛應(yīng)用(Schuckit，2016；Townsend?etal，2021)。而治療Meth依賴的臨床試驗前景一直不容樂觀，迄今尚無令人信服的理想治療方案(et?al，2017；Siefried?et?al，2020)。生物標(biāo)志物研發(fā)可能是實現(xiàn)藥物成癮診斷、治療以及防復(fù)吸的重要手段之一，而目前尤其甲基苯丙胺的生物標(biāo)志物的研究仍比較匱乏。能夠用于指導(dǎo)臨床的成熟生物標(biāo)志物較少，尋找新的穩(wěn)定可靠的甲基苯丙胺成癮相關(guān)的生物標(biāo)志物仍然是藥物成癮研究中亟待解決的問題。因此對甲基苯丙胺的生物標(biāo)志物研究，不僅可發(fā)現(xiàn)相關(guān)疾病的分子診斷和治療的標(biāo)志物，并有助于加深理解甲基苯丙胺所致的復(fù)雜性精神疾病的發(fā)病機制，甚至有潛力成為上述疾病的新治療靶點。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，最近的研究已揭示，轉(zhuǎn)運RNA(tRNA)來源的小RNA(tsRNA)在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后可調(diào)控基因表達，并在許多人類疾病的發(fā)生發(fā)展過程有著重要功能而使其成為生物標(biāo)志物研究的新熱點。tRNA可以被切割裂解成長度為18-40個核苷酸的異質(zhì)ncRNA群，稱為tRNA來源的小RNA(tsRNA)。基于它們的長度和切割位點的數(shù)量，tsRNA可分為2種主要類型：tRNA衍生的片段(tRF)和tRNA衍生的應(yīng)激誘導(dǎo)的RNA(tiRNA)。基于其有多種核苷酸修飾而結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定。這些RNA最初被認(rèn)為是tRNA隨機切割的副產(chǎn)物。越來越多的證據(jù)表明tsRNA在各種疾病(包括精神神經(jīng)疾病)病理過程中的廣泛參與，為人們嘗試開發(fā)基于tsRNA的生物標(biāo)志物成為可能(Shenet?al，2018)。它們既是細(xì)胞缺氧、中毒、氧化等應(yīng)激反應(yīng)的信號分子，又是基因表達的重要調(diào)節(jié)因子，這些特點使得tsRNA在疾病診斷與治療方法的開發(fā)應(yīng)用上具有廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)狀而提供一種檢測組織中表達tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2的引物在制備甲基苯丙胺成癮輔助診斷試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：該檢測組織中tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2表達的引物在制備甲基苯丙胺成癮輔助診斷試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于：該tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2在甲基苯丙胺成癮大鼠腦組織中的特異性表達下調(diào)：

所述引物為：

F1：5’GATCGCATGGGTGGTTCAGT?3'；

R1：5’CTCTTCCGATCTAGGCGAGAAT?3’。

進一步地，所述試劑盒還包括有外參基因U6的特異性擴增上下游引物：

F2：5’GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT?3’