[發明專利]基于PEI功能化GO和ROP雙信號放大策略的高靈敏cTnI檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202211640248.5
• 申請日: 2022-12-20
• 公開（公告）號: CN116539689A
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 程迪;張亞萍;周振波;楊懷霞;劉艷菊
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N33/68;C07F17/02
• 代理公司: 鄭州中鼎萬策專利代理事務所(普通合伙) 41179
• 代理人: 徐文婷

1.基于PEI功能化GO和ROP雙信號放大策略的高靈敏cTnI檢測試劑盒，其特征在于，包括：金電極、Apt1、MCH、Apt2-GO-PEI生物偶聯物、NCA-Fc。

2.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，還包括LiClO₄、超純水、PBS緩沖液。

3.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，Apt1的序列為：

5’-SH-(CH₂)₆-CGTGCAGTACGCCAACCTTTCTCATGCGCTGCCCCTCTTA-3’。

4.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，NCA-Fc的合成方法為：

(1)稱取二茂鐵甲酸溶于DCM中，0℃條件下滴加三乙胺，再依次加入HBTU和HOBT，反應1h后，旋轉蒸干，得到產物Fc-OBT；

(2)將TFA在0℃條件下滴入Boc-L-Lys?NCA的DCM溶液中，反應1h后，移入室溫攪拌過夜，得到NCA產物；

(3)將三乙胺在0℃條件下滴入所制備的Fc-OBT中，然后加入所制備的NCA，室溫反應2天，薄層色譜法監測反應過程，反應結束后進行后處理得到單體NCA-Fc。

5.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，

步驟(1)和(2)中二茂鐵甲酸：三乙胺：HBTU：HOBT：Boc-L-Lys?NCA的摩爾比例為1：2：1：1：1；

步驟(2)中TFA：Boc-L-Lys?NCA：DCM的比例關系為0.41mL：1mmol：3mL；

步驟(1)和(3)中三乙胺的用量相同；

步驟(3)中后處理為依次用飽和NaHCO₃溶液、0.5M鹽酸溶液、飽和NaHCO₃溶液和超純水洗滌，分離DCM有機相，用無水Na₂SO₄干燥、過濾，真空干燥。

6.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，Apt2-GO-PEI生物偶聯物的制備方法為：

將4mg?GO-PEI分散在2mLPBS緩沖液中，然后將200μL?10μM?Apt2溶液加入上述分散液中，在37℃下孵育3h，將產物離心并洗滌，最后用PBS緩沖液重新分散離心產物，以獲得均勻的Apt2-GO-PEI生物偶聯物；

Apt2的序列為：5’-CGCATGCCAAACGTTGCCTCATAGTTCCCTCCCCGTGTCC-3’。

7.一種如權利要求1-6任一項所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)金電極的修飾和ROP反應

①將Apt1溶液滴加到金電極上，反應，洗滌，吹干；

②將步驟①的電極浸泡在MCH溶液中，反應，洗滌，吹干；

③將待檢測樣品滴加至步驟②的電極表面，反應，洗滌，吹干；

④將Apt2-GO-PEI生物偶聯物溶液滴加到步驟③的電極上，反應，洗滌，吹干；

⑤將NCA-Fc溶液滴加到步驟④的電極表面，反應，洗滌，吹干；

(2)電化學檢測

將修飾后的電極浸入LiClO₄溶液中，通過方波伏安法記錄電流響應，根據電信號大小分析cTnI含量。

8.根據權利要求7所述的使用方法，其特征在于，金電極需進行前處理，前處理方法為：

①將金電極分別用無水乙醇和超純水超聲洗滌；

②分別用0.3μm和0.05μm氧化鋁粉對金電極表面進行拋光打磨；

③依次用超純水、無水乙醇和超純水超聲洗滌；

④用新配制的水虎魚酸溶液浸泡金電極；

⑤重復步驟③；

⑥在0.5M?H₂SO₄溶液中浸泡電極，電位范圍設定為-0.3～1.5V，掃描速率為0.2V/s，重復掃描直至得到重合的循環伏安圖；

⑦用超純水洗滌電極，氮氣吹干。