[發明專利]一種煙酰胺核糖磷酸轉移酶的封裝工藝在審
| 申請號： | 202211639686.X | 申請日： | 2022-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN116396945A | 公開（公告）日： | 2023-07-07 |
| 發明（設計）人： | 陸致賢;陳鑫 | 申請（專利權）人： | 浙江維泰生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N11/14 |
| 代理公司： | 無錫嘉馳知識產權代理事務所(普通合伙) 32388 | 代理人： | 張華偉 |
| 地址： | 313009 浙江省湖州市南潯經*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 煙酰胺 核糖 磷酸轉移酶 封裝 工藝 | ||
1.一種煙酰胺核糖磷酸轉移酶的封裝工藝，其特征在于：所述封裝工藝包括以下步驟：
(1)分別將單鏈DNA(ssDNA)與三(2-羧乙基)膦(TCEP)、煙酰胺核糖磷酸轉移酶(NNPT)與4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸-3-硫代-N-琥珀酰亞胺脂內鹽(SMCC)混合反應3h，分別記為ID1與ID2，離心超濾純化后再將ID1與ID2混合反應12h，然后離心超濾純化；
(2)在十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)與2-甲基咪唑的水溶液中加入醋酸鋅，攪拌溶解后加入步驟(1)中的ssDNA-NNT復合物，攪拌均勻后靜置3h；
(3)將步驟(2)中產物離心后收集固體，使用去離子水洗滌，重復2次后將固體渦旋分散均勻，得到混合液M1；
(4)將硝酸鈷溶解于乙醇與水的混合溶液，攪拌的同時加入步驟(3)中的混合液M1，反應10min后離心收集固體，將其離心洗滌三次后加入HEPES分散溶解，得到最終產物。
2.根據權利要求1所述的煙酰胺核糖磷酸轉移酶的封裝工藝，其特征在于：所述步驟(1)中，NNPT與ssDNA的質量比1:0.1-1：1.0，ssDNA的長度為20-60base，NNPT與TCEP的質量比為1:0.01-1:0.05，NNPT與SMCC的質量比為1:0.1-1:1.0。
3.根據權利要求1所述的煙酰胺核糖磷酸轉移酶的封裝工藝，其特征在于：所述步驟(1)中，離心超濾所用離心管的截留分子量為10k。
4.根據權利要求1所述的煙酰胺核糖磷酸轉移酶的封裝工藝，其特征在于：所述步驟(2)中，ssDNA-NNT復合物與CTAB的質量比為1:0.01-1：0.05，復合物與2-甲基咪唑的質量比為1:5-1:20，復合物與醋酸鋅的質量比為1:1-1:10。
5.根據權利要求1所述的煙酰胺核糖磷酸轉移酶的封裝工藝，其特征在于：所述步驟(4)中，乙醇和水的體積比為1:1-1:5，硝酸鈷的加入量為溶液質量的0.1％到1.0％。所用HEPES的pH為7.4。
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