[發明專利]甲型肝炎病毒H2

在審

• 申請號: 202211624596.3
• 申請日: 2022-12-16
• 公開（公告）號: CN116047069A
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 鐘淑玲;管新華;李強;高孟;朱赟;張月;忻亞娟
• 申請（專利權）人: 浙江普康生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 杭州華進聯浙知識產權代理有限公司 33250
• 代理人: 李麗華

1.一種檢測甲型肝炎病毒H₂減毒株抗原的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括抗H₂減毒株多克隆抗體包被酶聯反應板和酶標記甲肝單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物反應液和終止液中的一種或多種。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述抗H₂減毒株多克隆抗體由甲型肝炎病毒H₂減毒株免疫動物純化后獲得。

4.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述酶聯反應板的獲得方法包括如下步驟：

將所述抗H₂減毒株多克隆抗體用包被液稀釋一定倍數，加到酶聯反應板中，放置第一預定溫度環境中，孵育第一預定時間，使抗體與酶聯反應板充分結合，加入封閉液，放置第二預定溫度環境中，孵育第二預定時間，烘干后，待酶聯反應板干燥后2-8℃密封保存。

5.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標記甲肝單克隆抗體為辣根過氧化物酶標記的鼠抗人甲型肝炎病毒單克隆抗體。

6.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液為含有0.1％Tween-20的磷酸鹽緩沖液；所述濃縮洗滌液為20×濃縮洗滌液，含有1％Tween-20的磷酸鹽緩沖液。

7.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述底物反應液為單組份超靈敏3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺溶液；所述終止液為2mol/L的硫酸溶液。

8.權利要求1-7任一項所述的試劑盒在檢測甲型肝炎病毒H₂減毒株抗原中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述檢測的樣品為疫苗生產過程中的H₂減毒株病毒種子批、病毒收獲液、原液、半成品或成品疫苗。

10.一種檢測樣品中甲型肝炎病毒抗原含量的方法，其特征在于，所述方法包括使用權利要求1-7任一項所述的試劑盒進行甲型肝炎病毒H₂減毒株抗原含量檢測；

可選地，包括如下步驟：

(a)將標準品和待測樣品分別進行倍比系列稀釋，制成多個不同濃度的標準品溶液和待測樣品溶液，加入到酶標反應板的不同反應孔中，將酶標反應板轉移到第三預定溫度環境中，孵育第三預定時間，用洗滌液沖洗所述酶標反應板；

(b)將所述酶標記甲肝單克隆抗體用樣品稀釋液稀釋，加入到所述酶標反應板的反應孔中，將所述酶標反應板置于第四預定溫度環境中，孵育第四預定時間，用洗滌液沖洗所述酶標反應板；

(c)將所述底物反應液加入到酶標板的反應孔中，將酶標反應板置于第五預定溫度環境中，孵育第五預定時間；

(d)將所述終止液加入到顯色孵育后的酶標反應板的每個反應孔中，終止底物反應；

(e)用雙波長或單波長的光波檢測酶標板中每個反應孔的OD值；

(f)根據所述標準品溶液中標準品的濃度和對應的OD值擬合標準曲線；

(g)根據所述標準曲線和所述不同濃度待測樣品的OD值，獲得不同濃度待測樣品中的抗原含量。