[發(fā)明專利]一種基于噬菌體基因?yàn)榘袠?biāo)的柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211619961.1
• 申請(qǐng)日: 2022-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN116083610A
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭正;李紫怡;鄧曉玲;許美容;張玲;王成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/686;C12R1/01
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

1.一種基于噬菌體基因?yàn)榘袠?biāo)的柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物，其特征在于，包括引物對(duì)GP04-F/GP04-R，其上下游引物序列依次如SEQ?ID?NO.1～2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物，其特征在于，還包括引物對(duì)CLas-4G/HLBr，其上下游引物序列依次如SEQ?ID?NO.3～4所示。

3.權(quán)利要求1或2所述柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物在檢測(cè)柑橘黃龍病菌亞洲種中的應(yīng)用。

4.一種柑橘黃龍病菌亞洲種的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.提取待測(cè)樣品基因組DNA；

S2.以步驟S1的DNA為模板，利用權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物進(jìn)行單重或雙重實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)，若實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)得到的Ct值大于32則表示待測(cè)樣品未感染柑橘黃龍病亞洲種，若Ct值小于32則表示待測(cè)樣品感染柑橘黃龍病亞洲種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟S2所述單重實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)的擴(kuò)增體系為：ddH₂O?8.0μL，Supermix?10.0μL，10μmol/L?GP04-F0.5μL，10μmol/L?GP04-R0.5μL，DNA模板1.0μL，共20μL；雙重實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)的擴(kuò)增體系為：ddH₂O?7.0μL，Supermix?10.0μL，10μmol/L?CLas-4G?0.5μL，10μmol/L?HLBr?0.5μL，10μmol/L?GP04-F0.5μL，10μmol/L?GP04-R?0.5μL，DNA模板1.0μL，共20μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測(cè)方法，其特征在于，步驟S2所述單重或雙重實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)的反應(yīng)條件為：95℃，3min；95℃10s，60℃30s，40個(gè)循環(huán)；在每個(gè)循環(huán)的60℃結(jié)束時(shí)進(jìn)行熒光信號(hào)讀取。

7.權(quán)利要求1或2所述柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物在制備柑橘黃龍病菌亞洲種檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

8.一種柑橘黃龍病菌亞洲種檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1或2所述柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述試劑盒，其特征在于，還包括實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)所需試劑。

10.權(quán)利要求8或9所述柑橘黃龍病菌檢測(cè)引物在檢測(cè)柑橘黃龍病菌亞洲種中的應(yīng)用。